ДНК больших размеров, пульс-электрофорез

Метод пульс-электрофореза (ПЭФ) fl] дает возможность разделять ДНК индивидуальных хромосом дрол<жей и простейших [2, 3]. Размеры этих молекул варьируют от 0,2 до Юх Х10 нуклеотидных пар. В настоящее время создана технология выделения и обработки ДНК таких больших размеров как для эукариот, так и для прокариот [4—7]. Таким образом, теперь существует возможность изучать целые хромосомы (практически из любых организмов), последовательности ДНК которых насчитывают несколько миллионов оснований. Получены физические карты больших районов некоторых хромосом млекопитающих [8] и целой хромосомы Esheri hia oli [9]. Цель этой главы — рассказать читателям о биохимических методах, используемых при выделении больших молекул ДНК, и методах ПЭФ, применяемых для их анализа. Пульс-электрофорезу посвящено значительное количество обзоров [10, И, 12]. [c.58]

Из некоторых источников ДНК постоянно выделяется с небольшим количеством низкомолекулярных примесей размером 50—100 т. п. н., видимо из мертвых клеток. Наиболее характерно это для лимфобластов. Такие деградировавшие молекулы ДНК могут сильно искажать результаты прыжков по хромосоме , поэтому необходимо удалить их из агарозных блоков перед обработкой рестриктазами. Для этого блоки (как маленькие, так и большие) помещают в лунки ОРАОЕ-геля и проводят пульс-электрофорез в течение 2—3 ч с интервалами между импульсами 20 с. Молекулы ДНК размером менее 100 т. п.н. выходят из блоков в гель, а высокомолекулярная ДНК остается практически без изменения. Блоки затем можно изъять из геля, получив, таким образом, высококачественный материал для дальнейшего исследования. [c.102]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология