Амплификация нуклеиновых кислот, изотермическая

Изотермические системы амплификации нуклеиновых кислот, основанные на транскрипции [c.243]

Как видно из всего представленного в этой главе материала, в последние несколько лет было разработано много новых подходов амплификации последовательностей нуклеиновых кислот как с помощью различных вариантов ПЦР, так и альтернативных методов, включая изотермическую амплификацию. Методы амплификации, с помощью которых в ряде случаев можно заменять традиционное клонирование и осуществлять детекцию специфических последовательностей, становятся все менее трудоемкими, более быстрыми и чувствительными. Прослеживается тенденция к автоматизации всех указанных процессов. Метод ПЦР стал незаменимым в молекулярно-генетических исследованиях, и пока не видно предела его дальнейшему совершенствованию и развитию. [c.250]

В заключение этой главы кратко рассмотрим уже упомянутый метод изотермической амплификации нуклеиновых кислот, осуществляемой на кольцевых ковалентно замкнутых молекулах ДНК по типу катящегося кольца (rolling ir le amplifi ation -R A) [331]. В методе линейной R A используется один праймер, комплементарный кольцевой одноцепочечной ДНК, которая может быть получена денатурацией исходных двухцепочечных молекул. Синтезировав комплементарную цепь, ДНК полимераза начинает вытеснять 5 -конец синтезированной цепи из гибрида, причем процесс продолжается непрерывно на протяжении всей реакции, во время которой фермент совершает множество оборотов вокруг амплифицируемой кольцевой матрицы. Продуктом R A является длинная одноцепочечная ДНК, в которой мономеры, комплементарные исходной кольцевой молекуле, следуют друг за другом в виде конкатемера. Поскольку в этом случае гигантская молекула ассоциирована с единственным праймером, метод R A с успехом используется для амплификации сигнала на микроматрицах [331]. При этом на двумерных и трехмерных микроматрицах имеет место возрастание сигнала в 10 ООО раз по сравнению с сигналом, получаемым от отдельного зонда, меченного флуоресцентным красителем. Ковалентное связывание 5 -концов праймеров для R A с антителами позволяет обнаруживать белки в концентрации до 0,1 пг/мл анализируемой жидкости [332, 333]. [c.250]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология