Мутагенез делеции и вставки

Вырожденные праймеры, которые представляют собой сложную смесь олигонуклеотидов, содержащих многие точковые мутации, также используют для сканирования определенных участков ДНК [23]. В таком классическом варианте постановки ПЦР, кроме точковых мутаций, можно легко получать делеции и вставки. Дальнейшим усовершенствованием метода направленного мутагенеза с помощью ПЦР явилась разработка подхода к созданию гибридных генов с помощью перекрывающихся праймеров [24] (рис. 35). Этот метод позволяет не только целенаправленно получать точковые мутации, делеции и встав- [c.295]

Возможность вводить в изолированный ген заранее запланированные мутации — делеции, вставки или специфические замены нуклеотидов — была настолько заманчивой, что побудила большую группу ученых разных лабораторий к разработке методов направленного мутагенеза in vitro. [c.171]

Как видим, сегмент-направленный статистический (случайный) мутагенез можно осуществлять альтернативными методами. Получающийся при этом широкий спектр мутантов позволяет проводить исследование структурно-функциональной организации изучаемого локуса. Недостатки данного подхода состоят в том, что с его помощью сложно получить мутант со строго определенными заменами нуклеотидов и нельзя ввести в ДНК заранее запланированные делеции и вставки. Эти возможности обеспечивает олигонуклеотид-направленный (сайтспецифический) мутагенез- [c.180]

Пионерские работы по олигонуклеотид-на-правленному мутагенезу фага М13 и гибридов на его основе провели Дж. Мессинг с сотрудниками (1981-1983 гг.). Они продемонстрировали возможность вводить в геном фага с помощью олигонуклеотидов направленные замены, вставки, делеции (рис. 6.11). Таким путем, в частности, получены новые векторные производные серии Ml Зтр (рис. 6.12). Важной особенностью данного метода является то, что олигонуклеотид-мутаген может быть использован для эффективного отбора получаемых мутантных клонов. С этой целью выросшие после трансфекции клоны ДНК гибридизуют на нитроцеллюлозе с З2р меченным синтетическим олигонуклеотидом-мутагеном при низкой температуре, а затем осуществляют последовательные отмывки радиоактивного зонда при повы- [c.183]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология