Этап 2. Встраивание генов в вектор

Этап 2. Встраивание генов в вектор [c.222]

Этап 2. Встраивание нужного гена в вектор. [c.217]

Выделение малых плазмид в больших количествах из . o/i — это важный этап любой серии манипуляций, имеющей целью встраивание генов в трансформирующие векторы растений. Плазмиды могут содержать ген, предназначенный для переноса, в специфичном рестрикционном фрагменте или могут быть частью векторной системы трансформации растений, например промежуточным вектором для коинтеграции с модифицированной плазмидой или бинарным вектором, способным реплицироваться в Е. oli и агробактериях. [c.42]

На рис. 111 представлены этапы конструирования и окончательная структура соответствующего вектора. Этот вектор включал в себя фрагмент, содержащий экзоны 3 и 4. В экзон 3 был вставлен ген neo, обеспечивающий устойчивость к антибиотику неомицину (G418). В качестве промотора гена neo использовали промотор гена фосфоглицерокиназы (PGK-иео-кассета). Для проведения негативной селекции против случайного встраивания в ге- [c.302]

В модели, представленной на рис. 10.45, отсутствует ряд важных деталей, так что для разных этапов процесса можно предложить несколько конкретных механизмов. Например, синтез второй цепи кДНК может происходить до встраивания в новый геномный локус или к ДНК в месте разрыва может присоединиться сама РНК и затем синтезироваться кДНК in situ. Все эти модели весьма привлекательны, и в их поддержку появляются все новые данные правда, можно построить и другие модели, удовлетворяющие большинству этих данных. Итак, распределение каких-то последовательностей по всему геному может проходить по-разному. Высказывалось предположение, что природными рекомбинантными векторами являются ретровирусы. Ретровирусные геномы действительно внедряются в клеточные гены и по прошествии одного или нескольких клеточных циклов могут покидать эти гены, встраиваясь в новые локусы. За время жизненного цикла ретровируса его геном поочередно бывает представлен то ДНК, то РНК. При этом из РНК во время сплайсинга могут удаляться интроны, в результате чего на стадии ДНК образуются процессированные гены. Эта модель объясняет наличие необычных последовательностей в процессированных генах с 5 -стороны от сайта инициации транскрипции, а также отсутствие А-богатого З -конца. Из нее, в частности, следует, что некоторые процессированные гены должны соседствовать [c.268]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология