Трансформирующие векторы на основе

Использование специальных трансформирующих векторов на основе Ti-плазмид [c.27]

Введение генов непосредственно с помощью Ti-плазмид не используется, поскольку приводит к образованию опухолевых клеток, из которых невозможно получить целое растение. Для этих целей применяют векторные молекулы на основе Ti-плазмид с удаленными онкогенами. Вместо онкогенов в вектор можно встраивать стандартными методами по сайтам рестрикции последовательности клонируемой ДНК [193, 194]. В таких челночных векторных плазмидах сайты рестрикции, по которым производят клонирование, расположены в искусственной Т-области, фланкированной вышеупомянутыми повторами. В качестве селектируемых маркеров в этих плазмидах используют расположенные в Т-области гены устойчивости к антибиотикам или гербицидам, которые позволяют отбирать трансформированные клетки растений. После введения клонируемой последовательности рекомбинантным вектором трансформируют клетки агробактерий и с их помощью при участии vzr-генов осуществляют перенос всей генно-инженерной конструкции в клетки растений. Гены вирулентности могут находиться как в составе самого вектора, так и в ira/15-положении на плазмиде-помощнике. Для получения генетически модифицированных растений суспензию агробактерий можно инкубировать с протопластами, интактными клетками, тканями, листьями или даже целыми растениями. Во всех случаях достигается высокоэффективный перенос рекомбинантной ДНК в геном трансформируемых клеток. Интеграция рекомбинантной ДНК происходит случайным образом с небольшим предпочтением участков активно транскрибируемых генов. [c.140]

Для переноса чужеродной ДНК в растения использовались как А. tumefa iens, так и А. rhizogenes. Относительно генетических функций Ri-плазмид известно гораздо меньше, и поэтому векторы для трансформации, сконструированные на их основе, будут обсуждаться отдельно (разд. 1.1.8). На основе Ti-плазмид разработаны многочисленные трансформирующие векторы общего назначения (примеры приведены в табл. 1.1 и 1.2). Эти [c.18]

Векторы на основе бактериофага X не очень пригодны для получения больших количеств белковых молекул. Чтобы решить эту проблему, сконструировали такой вектор, в котором ДНК Н-и L-цепей встраиваются в сайт, фланкированный плазмидной ДНК. Такую плазмиду, содержащую ДНК Н- и L-цепи, можно вырезать из вектора и трансформировать ею Е. oli (рис. 10.12). Являясь частью плазмиды, ДНК Fv-фрагментов будет многократно реплицироваться в клетках Е. соИ с образованием большого количества продукта, который можно использовать как в диагностическгк, так и в терапевтических целях. [c.219]

Оказалось, что нет необходимости использовать олигомерные формы достаточно, чтобы векторы содержали прямые или обратные повторы ДНК. Такие векторы, созданные на основе плазмиды pSM 19035 из Str. sanguis hallis), способны трансформировать клетки Вас. subtilis с высокой эффективностью в мономерной форме (рис. 33). [c.172]

После упаковки трансформируйте этим препаратом клетки 5мр/ +-штамма (хорошо подходит для этой цели ЬР392) и 5мр/ -штамма (лучше всего МС1061). За основу для расчетов возьмите цифры из табл. 1. Заметьте, бляшки на газоне МС1061 могут давать только рекомбинантные фаговые частицы, несущие зирР. Но для создания полной геномной библиотеки лигировать и упаковывать необходимо и все остальные фрагменты генома. А для этого, в свою очередь, нужны большие количества вектора и экстракта для упаковки. [c.110]

Селекцию растительных клеток, трансформированных неонкогенными векторами, на фоне нетрансформированных клеток можно осуществить по их способности расти на питательной среде, содержащей антибиотики, в норме токсичные для таких клеток. Из подобных резистентных к антибиотикам тканей можно регенерировать нормальные побеги с помощью стандартных методов культуры тканей. Однако при попытках трансформировать растительные клетки неонкогенными векторными системами на основе Ti- или Ri-плазмид перед исследователем встает следующая проблема. В отличие от индукции корончатого галла или косматого корня неонкогенные трансформированные растительные клетки необходимо снабдить ростовой средой строго определенного состава, содержащей правильное соотношение фитогормонов. Такие среды специально подбирают для конкретных видов (или даже сортов) растений, чтобы поддержать образование каллуса после непродолжительного деления клеток в ответ на поранение. Обычно пораженную ткань культивируют in vitro — с этим подходом связаны различные проблемы, имеющие отношение к селекции трансформированных клеток [c.101]

Чтобы упростить манипуляции с ДНК и частично решить проблему ограничения круга хозяев, растительные протопласты трансформируют путем непосредственного введения векторнок ДНК. Однако сразу же следует подчеркнуть, что, хотя в настоящее время теоретически возможна трансформация практически любой системы протопластов, проблема регенерации трансформированных растений из полученных на основе протопластов тканей окончательно не решена. Поэтому трансформация протопластов имеет ограниченное применение (некоторые возможности ее использования обсуждаются ниже) [c.196]

Один из подходов к генетическим модификациям многоклеточных организмов заключается в изменении генотипа только одного вида дифференцированных клеток соматических. Для этого выделяют нужные клетки, помещают их в культуральную среду, обеспечивающую их жизнедеятельность и деление, трансформируют клетки рекомбинантным вектором, содержащим интересующий ген или соответствующую кДНК, и вновь вводят клетки в организм, из которого они были извлечены. Этот подход лежит в основе разрабатываемых ныне методов коррекции некоторых наследственных нарушений у человека. В опытах используют красный костный мозг млекопитающих, который содержит стволовые клетки- предшественники циркулирующих клеток крови (рис. IV. 13). Трансформацию проводят разными способами, в основном с помощью ретровирусных векторов, несущих специфические функциональные гены млекопитающих. В настоящее время [c.362]

В настоящее время имеется достаточный набор векторных молекул для проведения широкого спектра генно-инженерных экспериментов в клетках бацилл. Недостаток этих векторов состоит в том, что они не способны в мономерной форме трансформировать компетентные клетки В. subtilis. Качественно новые векторы для бацилл удалось создать на основе некоторых плазмид грамположительных бактерий рода Strepto o us. [c.246]

Некоторые векторы животных все-таки существуют в клетках животных в виде стабильно реплицирующихся внехромосомных ДНК. К ним относятся векторы, полученные на основе вируса папилломы крупного рогатого скота (разд. 5.7.в), и другие векторы, содержащие область ori репликации ОДНОГО из герпесвирусов —вируса Эпщтейна-Барр. В больщинстве случаев стабильная трансформация связана с рекомбинационным внедрением трансформирующей ДНК в геном клетки. Как реплицирующиеся векторы, так и нереплицирующаяся ДНК способны вызывать инсерционную трансформацию. Интеграция в этих случаях осуществляется с помощью негомологичной рекомбинации в случайные участки генома. Именно этим данная ситуация отличается от ситуации в дрожжевых клетках, где трансформация чаще всего происходит за счет ГОМОЛОГИЧНОЙ рекомбинации между донорной ДНК и сайтом-мищенью дрожжевого генома. [c.257]

Растительные клетки не содержат собственных плазмид. В этом случае в качестве основы для конструирования трансформирующих векторных систем в принципе могут использоваться независимо реплицирующиеся геномы различных растительных вирусов. Такие системы были созданы на основе генома вируса мозаики цветной капусты. Однако все наиболее соверщенные системы векторов растений получены на основе плазмид из семейства необычных бактериальных плазмид, носящих название pTi. Эти плазмиды образуют природную систему трансформации, с помощью которой осуществляется перенос сегаентов плазмидной ДНК в геномы разнообразных двудольных растений. [c.273]

Смотреть страницы где упоминается термин Трансформирующие векторы на основе: [c.31] [c.364] [c.364] [c.261] [c.292] [c.56] [c.111] [c.46] [c.202] [c.232] [c.378] [c.70] [c.44] [c.251] [c.261] [c.276] [c.308] [c.369] [c.111] [c.266] [c.266] [c.360]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология