Фенилметилсульфонилфторид

Охладите индуцированные клетки в ледяной бане и для уменьшения протеолиза добавьте фенилметилсульфонилфторид (ФМСФ, PMSF) до концентрации 1 мМ. Центрифугируйте клетки при 5000 g в течение 5 мин. Ресуспендируйте клеточные осадки в одном из следующих буферов для экстракции. [c.153]

Для ферментативной обработки ДНК, содержащейся в блок-вставке, необходимо предварительно инактивировать протеин-киназу К, оставшуюся после приготовления образца, и убрать диализом ЭДТА и детергенты (табл. 7). Протеиназа К весьма устойчивый фермент и может оставаться активной в растворе ESP при 4°С по крайней мере 1 год. Однако она полностью инактивируется при обработке фенилметилсульфонилфторидом (ФМСФ), который крайне нестабилен и свежий раствор которого поэтому надо добавлять ежедневно. Любая остающаяся во вставке протеиназа К разрушит вносимые ферменты. Необходима чрезвычайная аккуратность, чтобы не загрязнять лабораторный стол и используемое оборудование протеиназой К. В правильно выбранной агарозе эффективными будут если не все, то большинство рестриктаз. Когда рестриктазы не активны в ага- [c.70]

При повышенной температуре иногда обнаруживается усиленный протеолиз исходных белков. Известно, что денатурация белка многократно увеличивает егр доступность для атаки про-теолитическими ферментами. ДДС-Ка не входит в число их эффективных Ингибиторов. Если опасность протеолиза существует, в исходный препарат до денатурации белков вводят мощные ингибиторы протеаз фенилметилсульфонилфторид (300 мкг/мл) и 1,10-фенантролин (1 мг/мл). [c.63]

Смотреть страницы где упоминается термин Фенилметилсульфонилфторид: [c.303] [c.155] [c.171] [c.354] [c.37] [c.62] [c.62] [c.9] [c.353] [c.366] [c.10] [c.10] [c.188] [c.151] [c.188] [c.490] [c.59] [c.310] [c.469] [c.11] [c.142] [c.105] [c.12] [c.46] [c.257] [c.105]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология