Электрофорез в агаровом пептидов

Очищенный препарат иммуноглобулина диализуют против 0,1 М ацетатного буфера с pH 4,3, затем к нему добавляют кристаллический пепсин 1 в соотношении глобулин пепсин 50 1 и, если необходимо, доводят pH до 4,3 1 М уксусной кислотой. Смесь оставляют на водяной бане при 37°С на 8—14 ч, затем охлаждают во льду. Осадок, который может образоваться во время реакции, удаляют центрифугированием и доводят pH до 8,0 с помощью 1 М NaOH при этом значении pH пепсин инактивируется. Чтобы удалить мелкие пептиды, ферментированный иммуноглобулин диализуют против большого объема ЗФР или добавляют сульфат аммония до конечной концентрации 2,4 М, центрифугируют 30 мин при 5000g, осадок растворяют в ЗФР и раствор диализуют для удаления ионов сульфата. Чистоту готового препарата проверяют с помощью иммунодиффузин в агаровом геле (если имеются сыворотки анти-РаЬ и анти-F ) или более чувствительным методом электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН (см, гл. 4), сопоставляя интактный, восстановленный и алкилированный образцы. Если ферментолиз прошел не полностью [c.167]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология