Цитолизин

Рис. 2-7. Принцип ИФА без разделения компонентов с использованием конъюгата [лиганд — цитолизин] и фермента, включенного в липосомы (система, не зависящая от комплемента).

Конъюгат [цитолизин — антиген] [c.126]

Для выявления ДНК легионелл разработано несколько вариантов ПЦР, основанных на амплификации гена mip (кодирует поверхностный макрофаг-индуцирующий белок), гена цитолизина и ряда других маркеров. Наиболее широко применяется двухэтапная ПЦР-диагностика вначале — предварительное определение легионелл с универсальными для семейства праймерами (чувствительность — 30 — 50 клеток в образце), а затем проводят внутривидовую идентификацию L. pneumophila с использованием высокоспецифичных праймеров. Использование ПЦР позволяет также обнаруживать легионеллы в объектах внешней среды и изучать их связи в различных микробиоценозах. [c.138]

Методы, не зависящие от комплемента. В этом варианте анализа лиганд метят цитолизином, способным разрушать клеточную или липосомную мембрану. Конъюгат [лиганд — цитолизин (Л—Ц)] служит агентом, проникающим через мембра- [c.21]

Рис. 9-4. Схема иммуноанализа с помощью фермента, включенного в липосо- МЫ, без использования системы комплемента. Свободный антиген конкурирует с конъюгатом [определяемое вещество — цитолизин] за связывание с антителами. При образовании комплекса с антителами конъюгат теряет способность разрушать липосомы.

Рис. 9 5. Влияние специфических антител на литическую активность конъюгата [определяемое вещество — цитолизин]. Различные количества антител против дигоксина, очищенных иммунологическими методами, инкубировали 5 мин при 37 °С с конъюгатом [уабаин — мелиттин] (20 нм) и затем добавляли липосомы.

Рис. 9-6. Гомогенный иммуноанализ дигоксина с использованием липосом и конъюгата [определяемое вещество — цитолизин]. Различные количества свободного дигоксина инкубировали 5 мин при 37 °С с конъюгатом уабаин — мелиттин] (20 нМ) и антителами (78 нМ). Затем добавляли липосомы и измеряли активность освободившегося фермента, регистрируя поглощение при 410 нм.

Указанных недостатков лишен иммуноанализ на основе цитолизина (рис. 9-4), в котором используют липосомы с одной полостью, образующиеся при удалении детергента диализом. Новый метод не требует ни присоединения лекарственного препарата к липосомам, ни использования комплемента и обеспечивает быстрый лизис везикул. Липосомы, применяемые для анализа по этому методу, при хранении в замороженном виде в атмосфере аргона устойчивы в течение одного года (т. е. непроницаемы для заключенной в них щелочной фосфатазы), нО теряют устойчивость при удалении из их состава холестерола. Как показала электронная микроскопия с негативным окрашиванием, средний размер везикул составляет примерно 0,2 мкм. Добавление к везикулам конъюгата [уабаин—мелиттин (20 нмоль/л) сразу же вызывает полный лизис, но лизиса не происходит в случае предварительной инкубации конъюгата с избытком антител против дигоксина (рис, 9-5). Проводя такую инкубацию в присутствии известных количеств дигоксина, можно построить калибровочную кривую (рис, 9-6). [c.127]

Важное преимущество нового метода состоит в том, что одни и те же липосомы можно использовать с разными конъюгатами [цитолизин—определяемое вещество], в частности с конъюгатами [цитолизин—гаптен]. Действительно, липосомы,. которые применялись в описанных здесь опытах, были использованы также с конъюгатом [биотин—мелиттин] для определе- [c.127]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология