Полный лизис клеток

Обратимся теперь к роли репрессоров и активаторов транскрипции в регуляции жизненного цикла бактериофага лямбда (X). Зрелая вирусная частица состоит из линейной двухспиральпой молекулы ДНК (48 кЬ), упакованной в белковую оболочку. Существует два пути развития вируса он может разрушить клетку-хозяина или он может стать ее комнонентом (отсюда и название- умеренный). При литическом пути развития происходит полное выражение (экспрессия) фаговых генов, что приводит к лизису бактерии и образованию примерно 100 вирусных частиц потомства. В другом случае развитие фага X может пойти по пути лизогенизаиди клетки, когда его ДНК становится ковалентно связанной с ДНК клетки-хозяина в строго определенном месте (сайт-специфи-ческая интеграция). Этот процесс рекомбинации, в котором участвует кольцевая молекула ДНК фага мы обсудим ниже (разд. 30.16). Когда ДНК фага интегрирует с ДНК клетки-хозяина, большинство фаговых функций выключается. Фаговая ДНК в таком состоянии называется профагом, а клетка-хозяин, содержащая профаг-лг/зо-генной бактерией. Нрофаг реплицируется [c.120]

Можно избежать полного разрушения бактериальных стенок, проводя лизис в изотоническом или слабо гипертоническом (ОЛ -0,2 М) растворе сахарозы. В этих условиях под действием лизоцима из клеток образуются чрезвычайно чувствительные к осмотическим условиям округлые протопласты . В гипертонических и изотонических средах протопласты стабильны в гипотонических средах они лопаются, после чего остаются лишь тени (остатки плазматических мембран). Прото-пластами следует называть только такие округлившиеся клетки, у которых нет никаких остатков клеточной стенк1 т.е. нельзя обнаружить [c.54]

Для количественного определения нуклеиновых кис лот в культурах бактерий по описанным ниже методи кам необходимо, чтобы клетки присутствовали в доста точном количестве в среде, не мешающей определению или чтобы их можно было собрать из ростовой среды отмыть от компонентов среды, мешающих определению и ресуспендировать в нужной концентрации в отсутст вие лизиса бактерий или гидролиза нуклеиновых кислот нуклеазами. Важным условием для точного определения содержания в них нуклеиновых кислот является полная экстракция нуклеиновых кислот из клеток. [c.334]

Генетический анализ бактериофагов сопряжен с рядом трудностей, определяемых особенностями их развития в клетке. Репликация геномов Т-четных фагов идет экспоненциально со временем генерации 2—3 мин. Вплоть до образования количества фаговой ДНК, эквивалентного 50 полным геномам, зрелые частицы фага в клетке не обнаруживаются. Затем из общего фонда синтезируемой ДНК фаговые геномы начинают расходоваться на образование зрелых частиц. При лизисе клетки в ней остается еще столько же ДНК, сколько включилось в головки фагов. [c.219]

После проникновения хромосомы умеренного фага в клетку-хозяина либо немедленно начинается размножение фага (литический цикл), либо фаг переходит в состояние профага. Литическая фаза жизненного цикла умеренного фага соответствует полному жизненному циклу литического фага. Литические фаги названы так потому, что их размножение приводит к разрушению (лизису) бактериальной клетки. [c.482]

После того как количество вновь синтезированной фаговой ДНК достигает определенного уровня (примерно через 8 мин после инфицирования), синтез некоторых ранних ферментов прекращается и начинается синтез белков капсида. Еще один поздний продукт — это фаговый лизоцим. Полные вирусные частицы начинают появляться примерно через 15 мин после инфицирования. Когда их концентрация достигает максимума, клетка разрывается и фаги высвобождаются В последние годы изучению механизмов созревания уделялось очень много внимания. Вопрос этот будет обсуждаться в следующем разделе. Играет ли роль лизоцим фага в такого рода лизисе изнутри и разрыве клетки хозяина — все еще неизвестно. [c.259]

Последовательное применение генетического анализа и рас-щрфровка первичной структуры генов вскрыли неожиданный факт перекрывания генов у некоторых вирусов. Так, у ряда РНК-содержащих бактериофагов Е. соИ (R17, f2, MS2, Q ) были известны всего три гена репликазы, белка оболочки и созревания вирусной частицы. Мутации каждого гена, например у фага MS2, некомплементарны между собой, но комплементарны мутациям остальных двух генов. После расшифровки полной нуклеотидной последовательности РНК этих фагов на ней были локализованы все три гена. Однако обнаружена и четвертая группа мутаций, блокирующих лизис зараженной клетки. Эти мутации образовали самостоятельную группу комплементации, т. е. на основе функционального критерия аллелизма они были отнесены к самостоятельному гену, для которого уже не оставалось места на РНК бактериофага. Тем не менее путем исследования белкового синтеза in vitro с использованием РНК фага в качестве и РНК было выявлено реальное существование белка L размером в 75 аминокислотных остатков, кодируемого этим новым геном. Локализовать его удалось благодаря тому, что один из мутантов по гену лизиса нес нонсенс UGA, идентифицированный по взаимодействию с соответствующими супрессорными тРНК. У этого мутанта была расшифрована первичная структура РНК. Оказалось, что UGA возник в результате замены С на U в кодоне GA (Apr). Таким образом была установлена фаза считывания триплетов в гене ли- [c.404]

Бактериофаги, способные включаться в бактериальные хромосомы, называются лизогенизируюгцими бактериофагами. Наиболее полно изучен среди них бактериофаг лямбда (> ), о ферменте которого, лямбда-интегразе, мы уже говорили. Когда бактериофаг X заражает подходящую клетку Е. соИ, он обычно размножается в ней и образует несколько сотен дочерних фаговых частиц, которые выходят наружу в момент лизиса клетки это так называемый литический путь инфекции. Гораздо реже линейные инфицирующие молекулы ДНК замыкаются в кольцо и включаются в кольцевую хромосому бактерии-хозяина путем сайт-специфической рекомбинации (см. разд. 5.4.7). По заверщении такой интеграции образовавшаяся лизогенная бактерия, несущая хромосому бактериофага X в виде профага, размножается, как обычно, до тех пор, пока на нее не воздействует какой-нибудь повреждающий внешний [c.319]

В 1959 г. Д. Пратт сумел показать, что большинство, если не все бромурациловые ревертанты г+, образуемые мутантами гП (которые были индуцированы аналогами оснований), возникают в виде гетерозигот гП/г" , которые позднее расщепляются на гомозиготные ревертанты г" ". Чтобы продемонстрировать это, к бактериям, зараженным мутантным фагом Т4гП, непосредственно перед окончанием скрытого периода внутриклеточного развития фага добавляли бромурацил и первые инфекционные частицы, появившиеся в клетках непосредственно после окончания скрытого периода, высвобождали путем искусственного лизиса клеток. Такая методика постановки опыта гарантировала, что все ревертанты / +, возникшие и извлеченные из фонда предшественников фаговой ДНК во время короткого воздействия мутагена, образовались исключительно в самом последнем цикле репликации. Ошибка копирования, восстановившая у них в соответствующем участке ДНК генетическую информацию дикого типа г+, произошла настолько поздно, что больше и и одного цикла репликации произойти уже не могло (а это значит, что не могло произойти и расщепления на гомозиготные мутантные структуры). Такого рода опыты показали, что свыше 80% всех ревертантов г, возникших в результате кратковременного контакта с бромурацилом, действительно представляет собой мутационные гетерозиготы, несущие как исходный аллель г, так и ревертировавщий к дикому типу аллель г" . Следовательно, в полном соответствии с механизмом Уотсона и Крика и вопреки механизмам, предусматривающим консервативное распределе- [c.325]

Инкубируйте при 32°С до тех пор, пока культура не помутнеет (до плотности 10 —10 клетка/мл). После этого в течение по крайней мере 20 мин инкубируйте при 42°С. Продолжайте инкубировать при 37°С в течение 2 ч. Для полного лизиса добавьте каплю СНСЬ. [c.106]

Поступление ионов Ag+ можно обеспечить растворением солей серебра, контактом воды с металлическим серебром, посеребренными зернами кварца. Наиболее эффективным методом обогащения воды серебром является электрохимическое растворение серебряного анода. Преимущество соединений серебра перед остальными обззараживающими реагентами заключается в том, что их бактерицидное действие сохраняется в течение длительного времени, т. е. они являются одновременно и консервантами. Воздействие серебра на микробиальную клетку осуществляется в два этапа. Сначала происходит сорбция серебра на поверхности клетки, затем наблюдается проникновение его в клетку, что ведет к инактивации ферментов. Соединения серебра вызывают у кишечной палочки лизис цитоплазмы, повреждение нуклеотидов и отторжение содержимого клетки от оболочки. Бактерицидное действие серебра проявляется при концентрации его в воде более 0,04 мг/л. При концентрации серебра 0,1—0,2 мг/л кишечная палочка отмирает через 40—50 мин. Эффективность действия реагента зависит также от дозы вводимых ионов Ag+ и времени контакта с водой. Полное обеззараживание достигается при двухчасовом контакте. Доза вводимого серебра колеблется от 0,04 до 0,2 мг/л. [c.157]

Образование цитоплазматического ренрессора подавляет синтез белков фага и создает условия для его существования в форме профага. Одновременно и по той же самой причине вторичное заражение профага тем же вирусом оказывается неэффективным. Присутствие в клетке ренрессора блокирует синтез белков фага, и вторичная инъекция ДНК ни к чему не приводит. В этом и заключается смысл иммунитета лизогенных бактерий к вторичному заражению гомологическим фагом. Мутация цистронов ведающих образованием репрессоров, — они локализованы внутри области с в некотором сегменте im (от слова иммунитет), — может приводить к их ослаблению или полному выведению из строя. Соответствующие штаммы фага потеряют способность к лизогенизации. Следовательно, причины выбора внутри данной генетически однородной культуры между лизисом и лизогенизацией зависят еще от многих факторов и остаются во многом неясными. [c.384]

Термин инфекционность в том смысле, в каком он употребляется в данном контексте, относится ко всей совокупности событий, происходящих в процессе заражения проникновение инфекционного агента в клетку-хозяина репликация нуклеиновой кислоты, синтез вирусных белков (или белка) оболочки и других вирусоспецифичных соединений созревание вирусных частиц и, наконец, выход вируса из клетки, сопровождаемый или не сопровождаемый лизисом и другими цитоплазматическими изменениями, а также общими симптомами заболевания. Все эти различные биологические и биохимические стороны понятия инфекционности обсуждаются в последующих главах. Здесь же мы хотим обратить внимание читателя лишь на следующее обстоятельство. Биологическая активность вирусных нуклеиновых кислот имеет, как известно, две стороны, а именно матричную активность и активность в качестве переносчика информации. Оказалось, что для изучения этих активностей можно использовать не живую клетку-хозяина, а более простые системы, в частности бесклеточные системы in vitro с использованием очищенных ферментов [187, 344, 348]. Именно благодаря применению таких систем было выяснено, что для выполнения нуклеиновой кислотой отдельных функций, например для синтеза белковой оболочки, не требуется присутствия полной интактной молекулы нуклеиновой кислоты, или всего набора нуклеиновых кислот, или цельной вирусной частицы. Таким образом, используя в эксперименте отдельные фрагменты или компоненты РНК, можно пролить свет на функциональную роль различных частей молекулы нуклеиновой кислоты или комплекса нескольких молекул. О таких исследованиях упоминается в гл. XI, разд. Б. [c.180]

Эти нарушения в мужских половых железах связаны с прекращением деления клеток и деструкцией сперматогенного эпителия, в котором по мере развития поражения наблюдаются патологические митозы, вакуолизация, пикноз и распад ядра, вакуолизация и лизис цитоплазмы, сморщивание и распад клеток. По этим показателям наиболее радиочувствительными клетками в семенниках являются сперматогонии, затем сперматиды и спермато-циты и, наконец, зрелые сперматозоиды, так же как и элементы незародышевого ряда. Клетки Сертоли и интерстициальные клетки — наиболее радиорезистентные. Клеточное опустошение в семенниках уже отчетливо наблюдается на ранних стадиях общего облучения животных в невысоких дозах (например, 1 Гр для мышей). В процессе развития острого лучевого поражения клеточное опустошение прогрессирует вплоть до полного исчезновения клеток зародышевого эпителия и появления половой стерильности наряду с деструкцией в семенниках происходит явление своеобразного ускорения сперматогенеза — убыстренное созревание сперматозоидов. [c.193]

Метод состоит в следующем. Питательную среду сливают, а клеточный монослой заливают 10%-ным раствором дезоксихолата натрия в насыщенном растворе мочевины в воде (1 г мочевины на 1 мл бидистиллированной воды при 22 ) примерно 1—2 мл на 3X10 клеток. Клетки обрабатывают 30—60 минут при комнатной температуре. Лизис контролируют под микроскопом. Клетки разрушаются в течение нескольких минут, а лизис наступает после разбавления смеси до 5—10% конечной концентрации лизата, Разведение можно производить исходной культуральной жидкостью, стерильной водой или физиологическим раствором, охлажденными до 4 В этих условиях происходит полный цитолизис Центрифугирование лизата при 10 ООО об/мин не ведет к образованию осадка, характерного для обломков клеток. Наряду с этим происходит гидролиз клеточных белков и нуклеиновых кислот, так как ну-клеазы и протеазы в данных условиях резистентны к мочевине [483]. Низкомолекулярные вещества из лизата удаляют при помощи диализа в течение суток против бидистиллированной воды Полного удаления мочевины можно достичь с помощью уреазы, [c.39]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология