Галактозидаза использование при флуориметрическом ИФА

Авторы одной из работ (Neurath, Stri k, 1981) сообщают о том, что замена хромогенного субстрата на флуорогенный позволяет повысить чувствительность определения -галактозидазы на три порядка. Теоретически это должно означать, что применение флуориметрии вместо колориметрии при проведении ИФА с использованием -галактозидазы в качестве индикаторного фермента может в тысячу раз снизить предел обнаружения антигена. В действительности несмотря на то, что флуориметрический вариант ИФА, который авторы использовали для обнаружения поверхностного антигена вируса гепатита В человека, был примерно на два порядка более чувствительным, чем РИА, им не удалось достичь предельной чувствительности, предсказанной на основании данных по предельной чувствительности определения самого фермента. Оказалось, что чувствительность ограничивается фоновой флуоресценцией, наблюдаемой для образцов, не содержащих антигена. Фоновая флуоресценция может быть вызвана неспецифическим связыванием использованных антител. В таком случае повышения чувствительности можно достичь, только повышая специфичность собственно иммунохимических компонентов системы. Другое возможное объяснение связывает фоновую флуоресценцию с присутствием в реакционной смеси флуоресцирующих примесей. В этом случае следует использовать более чистые реагенты и (или) проводить окончательные измерения флуорес- [c.289]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология