Индикаторные бумаги на ферменты

Каталазы являются ферментами, каталитически разлагающими перекись водорода с образованием молекулярного кислорода. Поэтому их можно обнаружить по исчезновению перекиси водорода. Для обнаружения перекиси водорода можно использовать реакцию с солями титана, основанную на образовании желтых солей надтитановой кислоты. Хорошие результаты дает также индикаторная бумага, содержащая черный сульфид свинца, переводимый перекисью водорода в белый сульфат свинца . [c.596]

Для анализа фосфорсодержащих ОВ в полевых условиях весьма удобны индикаторные бумаги, содержащие смесь субстрата и индикатора . Преимущества этих методов заключаются в их простоте, быстроте проведения, потреблении незначительных количеств испытуемых веществ и реагентов, возможности работы в широком интервале температур. Дальнейшее совершенствование методов состоит в том, что на бумагу, содержащую субстрат и индикатор, наносят также лиофилизированную сыворотку . При использовании очищенных ферментов и хранении в сухом месте такие индикаторные бумаги хорошо сохраняются. Отличным способом для проведения большого числа параллельных определений является модифицированный диффузионный метод с агаром [c.176]

Пробы разбавляют дистиллированной водой так, чтобы они содержали 0,05—0,3 мг глюкозы в 1 мл. Устанавливают pH от 6,8 до 7,2 добавлением 0,1 н. КОН или 0,1 н. НС1. Для определения pH можно пользоваться индикаторной бумагой. Готовят контрольную пробу и серию стандартов, содержащих 0,05—0,3 мг глюкозы в 1 мл, путем разбавления дистиллированной водой. Добавляют фермент и хромофор и инкубируют смесь согласно инструкции фирмы-изготовителя. Добавляют пастеровской пипеткой 1 каплю 4 н. НС1 и определяют оптическую плотность в стеклянной кювете при 400 нм разд. 16.1.1). Определяют концентрацию глюкозы в пробах по стандартной калибровочной кривой, отражающей зависимость между оптической плотностью стандартных растворов и концентрацией глюкозы. [c.297]

Приготовляли три листа бумаги ватман № 1 такого же размера, как хроматограмма. Один лист погружали в воду и хроматограмму помещали на влажный лист. Второй лист погружали в раствор из 1 части плазмы человеческой крови, 3 частей воды, 0,1 части 0,1 н. раствора КаОН и 0,27 части индикаторного раствора (0,15 г бромтимолового синего в 25 мл 0,1 п. раствора КаОН) и накладывали на хроматограмму. Через 5—10 мин третий лист, смоченный в растворе субстрата (0,10 г хлористого ацетилхолина в 25 мл воды), помещали на эти три листа. Через 30—40 мин фон хроматограммы становится желтым вследствие выделения уксусной кислоты, тогда как поверхность, занятая пестицидом (ингибитором фермента), остается синего цвета. Чувствительность реакции для многих фосфорорганических соединений 0,2 мкг. [c.81]

Электрофорез проводят обычным способом, а затем на электрофореграмму осторожно, следя за тем, чтобы обе поверхности полностью соприкасались, накладывают индикаторный гель, содержащий субстрат, соответствующий буфер и кофакторы. Этот сэндвич инкубируют во влажной камере. После инкубации индикаторный гель (а в некоторых случаях исходную электрофореграмму) окрашивают для обнаружения продукта ферментативной реакции. Таким образом, этот метод дает контактный отпечаток зон, содержащих ферменты. Иногда индикаторный гель заменяют полоской фильтровальной бумаги. Обычно индикаторные гели готовят из агара или крахмала и значительно реже — из акриламида. Следует отметить, что данный метод позволяет также обнаруживать ферменты, имеющие низкомолекулярные субстраты. [c.281]

Сначала проверяют пригодность бума ги. Для этого наносят на одно и то же место предметного стекла по 0,05 мл воды и раствора фермента и рядом помещают 0,1 мл буфера сравнения. На оба эти участка накладывают кусочки суб-" страт-индикаторной бумаги, накрывают их стеклом и определяют время выравнивания окрасок обоих отрезков индикаторной бумаги, которое должно равняться 3—7 мин. Если выравнивание окраски не укладывается в указанный промежуток времени, то причиной этого может быть повышенное содержание кислоты в бумаге или индикаторе. В этом случае приходится готовить свежую индикаторную бумагу, используя другой сорт бумаги, либо повторить пропитку бумаги раствором субстрата и индикатора, который предварительно нейтрализуют прибавлением 0,1 н. раствора NaOH до появления зеленовато-синей окраски. [c.178]

Обнаружение ингибитора. На предметное стекло пипеткой наносят 2 капли по 0,05 мл раствора фермента. Левую каплю смешивают с 0,05 мл испытуемой воды, а правую — с 0,05 мл чистой воды, приготовленной для контрольной пробы. Перемешивание осуществляют двумя тонкими стеклянными палочками, следя за тем, чтобы всегда употреблялась соответствующая палочка. После инкубирования (5 мин для зарина, зомана, табуна, ДФФ и 15 мин —аля более медленно реагирующих ингибиторов) на оба участка накладывают кусочки индикаторной бумаги и покрывают покровным стеклом. В то время как индикаторная бумага на правой капле (контрольная проба) постепенно изменяет свою окраску от сине-зеленой через зеленую, лимонно-желтую до светло-желтой, бумага на левой капле при наличии фосфорорганических ингибиторов остается сине-зелекой или изменяет свой цвет значительно медленнее. [c.178]

В "лакокрасочной промышленности предпочитают применять казеин, коагулированный серной или соляной кислотами, так как казеин, осажденный молочной кислотой ли сычужным ферментом, дает менее вязкие растворы. Для получения казеина высокого качества необходимо строго контролировать процессы коагуляции снятого молока и осаждения казеина. Только если осаждение ведут при pH = 4,6, получают казеин, свободный от фосфата кальция, обладающий наибольшей растворимостью и легко промываемый благодаря зернистой структуре. Однако имеются и сторонники проведения осаждения в более кислой среде с контролем кислотности индикаторной бумагой (например, бромкрезольной) пли титрованием едким натром в присутствии фенолфталеина. [c.97]

Можно заполимеризовать субстрат и кофакторы в другом ( индикаторном ) геле на основе агарозы или импрегнировать ими фильтровальную бумагу. После окончания электрофореза белков в пластине рабочего ПААГ на его поверхность накладывают индикаторный гель или бумагу. Ферменты диффундируют в них из рабочего геля и обнаруживают себя соответствующей цветной реакцией. Габриель привел длинный список индикаторных цветных реакций для ферментов [Gabriel, 1971]. Во многих случаях в этих реакциях фигурирует восстановление НАД с дальнейшей передачей электрона на краситель. Удобно в качестве заключительного этапа реакции воспользоваться неферментативным восстановлением тетразолиевой соли до ее формазана, что дает сильно окрашенные и зачастую нерастворимые продукты (схема реакции приведена ниже), [c.102]

Методы с использованием иммобилизованных ферментов характеризуются высокой чувствительностью, особенно визуальный, или фотометрический, тест-метод определения ртути, основанный на ее ингибирующем действии на нативную пероксидазу хрена, иммобилизованную в хитозане, в присутствии тиомочевины, в реакциях окисления о-дианизидина, о-фени-лендиамина и 3,3, 5,5 -тетраметилбензидина. Нижние границы определяемых концентраций ртути 0.01, 0.05 и 0.0001 мкг/л соответственно [221]. Метод характеризуется не только высокой чувствительностью, но и селективностью — определению ртути мешают только 10-кратные избытки кадмия и висмута. Кроме того, он отличается эксирессностью (15 мин), простотой и дешевизной. Дальнейшее развитие позволило адаптировать его для определения ртути в природных водах с высоким содержанием железа ( 1 мг/л) и сократить время инкубирования. Минимальная определяемая концентрация ртути 0.01 мкг/л [220]. Более простой модификацией метода является тест-методика для определения ртути по ее ингибирующему действию на пероксидазу, иммобилизованную на хроматографические бумаги, с наименьшими определяемыми концентрациями ртути 0.01-0.04 мкг/л [219]. ПО аналогичной методики равен 5—10 нг/л [115]. Применение индикаторных бумаг на основе иммобилизованных на них ферментов имеет ряд очевидных преимуществ, упрощающих процедуру определения ртути в различных объектах. [c.123]

Недавно было показано, что с пероксидазой в роли индикаторного фермента может весьма успешно конкурировать глюкозооксидаза. Важнейшим преимуществом этого фермента является более низкий уровень фона, чем при использовании пероксидазы (Porter, Porter, 1984). Следует добавить также, что для весьма широкого круга ферментов продемонстрирована возможность непосредственного обнаружения (окрашивания соответствующих зон) после переноса на ДЭАЭ-бумагу (M Lel-lan, 1981). [c.362]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология