Электрофорез при средних значениях напряжения

Рнс. 482. Схема вертикального электрофореза при средних значениях напряжения [49]. [c.538]

Лунки диаметром 3—4 мм вырезают в геле ближе к его катодному концу. Делают это с помощью пластмассового трафарета и металлической трубки с достаточно острыми краями. Простое приспособление такого типа описал Вееке [1384]. Лунки должны быть расположены на расстоянии не менее 6 мм друг от друга и 1—1,5 см от краев геля (во избежание краевых эффектов). Чаще всего используют 20—80 мМ вероналовые буферы с pH 8,6. При таком значении pH средняя подвижность антител в гелях агарозы близка к нулю. Электрофорез можно проводить либо при относительно высоком напряжении (8—10 В/см) в течение 2—4 ч (быстрый ракетный электрофорез, при котором необходимо эффективное охлаждение), либо при низком напряжении (2 В/см) более длительное время (удобно проводить электрофорез в течение ночи). [c.249]

Для достижения максимального разделения используют диск-электрофорез— важное усовершенствование зонального электрофореза. (Как будет видно, термин диск относится не к форме полос, получаемых в этом методе, а к тому, что в системе используются неоднородные значения pH, что приводит к прерывистому напряжению.) Метод состоит в том, что первоначальный тонкий слой образца (1—2 мм) концентрируется в сверхтонкую стартовую зону толщиной от 1 до 100 мкм, как показано на рис. 9-12. Заметим, что гель находится в вертикальной колонке и представляет собой три отдельные области верхнюю, или область образца, среднюю, называемую прокладкой, и нижнюю, состоящую из собственно разделяющего геля. Область образца и гель-прокладка имеют меньшую концентрацию (больший размер пор), чем разделяющий гель, и готовятся в бустере с низкой ионной силой и различными значениями pH. Больший размер пор верхних слоев геля означает, что молекулы в них задерживаются меньше, двигаясь при этом быстрее, чем в нижнем геле. Кроме того, меньшая ионная сила обусловливает большее электрическое сопротивление, поэтому электрическое поле (Б/см) в верхнем геле больше, что также приводит к большей скорости движения молекул в верхнем геле по сравнению с нижним гелем. Соотношение значений pH по слоям приводит к такому же влиянию на подвижность. Быстрое движение через верхние слои геля приводит к накопле [c.235]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология