Фокусы трансформантов

Трансформация эмбриональных фибробластов крысы двумя онкогенами. При введении двух онкогенов в первичные эмбриональные фибробласты крысы возможен отбор трансформантов по фокусам морфологической трансформации без введения доминантных маркеров устойчивости. Процедура получения морфологических трансформантов при обработке клеток кальцийфосфатным преципитатом ДНК такая же, как описано выше. Смесь двух плазмид, которыми трансформируют первичные эмбриональные фибробласты, растворяют в буфере Б и формируют преципитат, которым обрабатывают клетки. Суммарное количество ДНК на 60 мм чашку, в которой находится 3 10 клеток, не должно превышать 20 мкг. Через сутки клетки рассевают и, меняя каждые 3 сут среду, ожидают появление фокусов морфологической трансформации, которые формируются через 18—21 сут после обработки клеток преципитатом плазмидной ДНК. Затем фокусы выделяют с помощью титановых цилиндров и после размножения клеток определяют гибридизацией по Саузерну присутствие двух онкогенных последовательностей, вводимых в составе различных плазмидных векторов. Выделенные трансформантные клоны можно использовать для изучения различных аспектов канцерогенеза (in vitro и in vivo). [c.230]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология