Процедура для получения вируса

Процедура получения вируса герпеса простого, вируса псевдобешенства или вируса энцефаломиокардита [c.199]

Процедура для получения вируса У40 [c.200]

В начале процедуры получают пузырьки, окруженные мембранами (липосомы). Затем липосомы загружают необходимым веществом, смешивая концентрированный раствор этого вешества и суспензию фосфолипидов. Другая модификация этого метода включает на первом этапе нарушение мембраны эритроцитов, приводящее к утрате ими клеточного содержимого, и последующее помещение полученных теней эритроцитов в раствор нужного вещества, где происходит их заполнение и затягивание плазматических мембран. Оба вида носителей (как липосомы, так и тени эритроцитов можно вводить в клетки-мишени за счет слияния мембран под действием определенных вирусных белков (синтезируемых вирусом [c.200]

Процедура временной трансфекции приведена в табл. 9.1. Детальное описание кальций-фосфатного метода трансфекции можно найти в гл. 15 тома II данной серии [34]. Титр вируса, полученного таким путем, зависит от всех параметров, в норме оказывающих влияние на эффективность трансфекции (чистота используемой ДНК, собственная восприимчивость клеток к этой ДНК и т. п.), а также от свойств конкретной векторной системы. Некоторые ретровирусные -конструкции воспроизводимо [c.288]

Титр вируса в культуральной среде инфицированных клеток можно определить с помощью целого ряда методик, в основе которых лежат физические, биохимические или биологические методы анализа. Наибольшее распространение получил способ, заключающийся в количественном определении вирусной геномной РНК в культуральной среде с помощью гибридизации с меченным ДНК-зондом. Эту стандартную процедуру дот-блот-гибридизационного анализа проводят после концентрирования препарата вируса, как описано в табл. 9.4. Количественное определение достигается путем сравнения интенсивности полученного гибридизационного сигнала с интенсивностью контрольных сигналов гибридизации точно титрованного вируса (разд. 9.6.1.3) или известных количеств РНК, или ДНК, нанесенных на фильтр. Используя разные ДНК-зонды, можно оценить концентрацию индивидуальых компонентов в вирусном препарате и непосредственно определить, содержит ли вирус интересующие нас последовательности. [c.297]

Один из контрольных опытов уже упоминался — он состоит в сравнении результатов, полученных при взаимодействии разных концентраций одних и тех же клегок с подходящими разведениями антител. Величины /Сим должны при этом оставаться постоянными. В такой пробе следует использовать одну взвесь клеток, чтобы избежать различий, не связанных с самой экспериментальной процедурой. На рис. 6 представлены кривые, полученные при изучении связывания различных разведений одного препарата антител с разными количествами клеток одной и той же линии, трансформированной вирусом Эпштейна—Барра (0,5, 1 и 2-10 клеток). Если через соответствующие экспериментальные точки провести прямые, то они почти совпадут друг с другом. Надежность метода можно также проверить и другим путем, например сравнивая результаты, полу- [c.25]

Клиническую диагностику вирусов, как правило, проводят в два этапа на первом— убеждаются в вирусной природе заболевания, на втором — идентифицируют вирус. Чаще всего вирус обнаруживают по ЦПД. При некоторых заболеваниях для постановки предварительного диагноза достаточно располагать сведениями о ЦПД и клинической картине заболевания. Так, например, во многих лабораториях, где проводят заражение фибробластов материалом, полученным с генитального мазка, указывают, что обнаружены признаки ЦПД, характерные для вируса простого герпеса . При этом последующую формальную идентификацию вируса не проводят. В других случаях признаки ЦПД характеризуют большую группу вирусов, например энтеровирусов 67 типов. Здесь постановка более точного диагноза будет зависеть от результатов реакции нейтрализации вируса специфическими антисыворотками (нейтрализационный тест). Последняя процедура требует много времени, поэтому возможны промежуточные сообщения, например выделены энтерови русы, необходима дальнейшая идентификация . [c.311]

Как мы уже отмечали, реовирусную инфекцию связывают с заболеваниями дыхательных путей и пищеварительного тракта. Вирус можно выделить из мазков, взятых из полости носа и рта, или из фекалий. В редких случаях его удавалось выделить из крови, мочи или спинномозговой жидкости. Для выделения вируса проводят культивирование кусочков тканей, полученных при биопсии или некропсии. Техника выделения реовируса из мазков суммирована в обзоре [241]. Образцы фекалий из ануса получают с помощью сухого ватного тампона. Поверхность тампона с видимыми следами фекалий взбалтывают в пробирке с раствором Хэнкса, содержащим пенициллин (500 ед./мл) и стрептомицин (500 мкг/мл). Аналогичные процедуры применяют и в случае мазков, взятых из полости рта и носа. Образцы следует хранить при —70 °С, хотя допустимо и кратковременное хранение в морозильной камере обычного холодильника. Образцы фекалий нужно предварительно отцент-рифугировать (3000 об/мин, 4°С, 30 мин) и лишь затем использовать для внесения в культуру ткани [241]. [c.318]

Беллами с сотр [193] для извлечения реовируса из зараженных клеток использовали более сложную процедуру. Клеточный осадок после центрифугирования ресуспендировали в среде, содержащей 0,01 М трисбуфер, pH 8, 0,25 М КаС1 и 0,01 М 2-меркаптоэтанол. Смесь гомогенизировали 30 секунд в высокоскоростном гомогенизаторе. Полученный гомогенат обрабатывали а-химотрипсином (25 мкг/мл) в течение часа яри комнатной температуре и затем инкубировали в течение часа о дезоксихолатом натрия (500 мкг/мл) при 0 Обломки клеток осаждали из смеси при 3000 g в течение 10 минут. Надосадочную жидкость декантировали. Осадок ресуспендировали в вышеуказанной среде и обрабатывали ультразвуком в течение 30 секунд в ультразвуковом дезинтеграторе МЗЕ. Обломки клеток осаждали вновь, а надосадки, содержащие вирус, объединяли и затем очищали вирус [c.38]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология