Клетка эмбриональные фибробласты

Необходимость применения фидерного слоя при культивировании ЭС клеток связано с продукцией LIF клетками первичных эмбриональных фибробластов, которые обеспечивают достаточный уровень концентрации этого фактора в непосредственной близости от ЭС клеток. Попытка стабилизировать плюрипотентные свойства ЭС клеток мыши линии R1 путем трансформации их геном lif подтверждает его участие в процессах раннего развития и дифференцировки. [c.298]

Как в организме при переходе от доброкачественных опухолей к злокачественным мы наблюдаем значительные изменения в строении клеток, так и различные культивируемые клетки образуют ряд, в котором их строение прогрессивно нарушается, по мере того как изменяются их биохимические характеристики. При трансформации вирусом нормальных эмбриональных фибробластов мыши можно видеть, например, как клетка из хорошо распластанной и имеющей большое количество пучков филаментов превращается в более круглую, содержащую меньше волокон натяжения и характеризующуюся менее упорядоченными взаимоотношениями с другими клетками. Чем больше степень трансформации клетки, тем меньше влияет на биохимические процессы в ней отсутствие прикрепления к субстрату. Так, у нормальных эмбриональных фибробластов при переносе их в суспензию синтез ДНК, РНК и белка резко подавляется на промежуточных стадиях трансформации в суспензированных клетках некоторые нормальные процессы (например, синтез гетерогенной ядерной РНК) продолжаются, а трансформированные вирусом клетки способны и синтезировать белки, и делиться в суспензии [200]. В тех клетках, в которых при помещении их в суспензионную культуру процессы синтеза прекратились, синтез белка возобновляется при возвращении их на субстрат сразу после прикрепления, а синтез РНК и ДНК начинается лишь при распластывании таким образом, различные процессы, протекающие в клетке, по-разному зависят от ее прикрепления к субстрату и пространственной организации [201]. [c.106]

У млекопитающих и птиц большинство нормальных клеток проявляет поразительную несклонность делиться неопределенно долго. Это отличает их от стабильных культивируемых клеточных линий, таких как ЗТЗ, в которых, видимо, произошли какие-то генетические изменения, делающие их бессмертными . Например, фибробласты, взятые от человеческого плода, при выращивании в стандартной среде осуществляют только около 50 удвоений популяции к концу этого периода пролиферация замедляется и затем останавливается, и все клетки, пробыв некоторое время в состоянии покоя, погибают. Такие же клетки, взятые от 40-летнего человека, перестают делиться примерно после 40 удвоений, а от 80-летнего - примерно после 30 удвоений. Фибробласты от животных с более короткой продолжительностью жизни прекращают деление в культуре после меньшего числа циклов. По аналогии со старением организма в целом это было названо клеточным старением. Клеточное старение представляет собой загадочный феномен. Короткие запрограммированные серии клеточных делений, которые заканчиваются дифференцировкой, -характерная особенность эмбрионального развития разд. 16.3.4), однако трудно представить себе, как клетки могли бы в течение долгого времени отсчитывать свои митотические циклы и останавливаться, пройдя, скажем, 50 делений. Согласно одной из теорий, клеточное старение - это результат катастрофического накопления самовоспроизводящихся ошибок биосинтетических механизмов клетки эти ошибки несущественны в природных условиях, где большинство животных гибнет от других причин задолго до того, как у них подвергнется старению значительное число клеток. С этой точки зрения клеточное старение просто отражает черты несовершенства в физиологии клетки, которые вполне естественны при очень слабом давлении отбора, направленного на их элиминацию. Однако в этом случае необходимо было бы объяснить, каким же образом клетки зародышевого пути, бессмертные клетки культивируемых линий и даже обычные соматические клетки при некоторых специальных условиях (описанных ниже) способны к бесконечной пролиферации. Другая гипотеза состоит в том, что клеточное старение-это результат механизма, который выработался для защиты от рака путем ограничения роста опухолей. Однако подобная защита представлялась бы неэффективной, так как пятидесяти циклов деления вполне достаточно [c.423]

Вообще деление клеток в процессе эмбрионального развития регулируется при совместном участии как автономных клеточных программ, так и межклеточных взаимодействий, но важность каждого из этих факторов меняется от вида к вид> и от одной части тела к другой. В зрелых тканях клеточное деление тоже регулируется сложной сетью различных механизмов при заживлении глубокой кожной раны у позвоночных, чтобы возместить потерю ткани, должны регенерировать в надлежащих количествах около 12 типов клеток, начиная с фибробластов и кончая шванновскими клетками. Кроме того, в системе социального контроля существует избыточность с многочисленными ограничителями, действующими параллельно гак, чтобы утрата одного контролирующего компонента в одной клетке (обычно это результат соматической мутации) не повредила целому организму вследствие появления огромного клона интенсивно делящихся клеток. Исследования в области рака показывают, что в данной клеточной линии должно произойти от четырех до шести мутаций, прежде чем она даст начало злокачественной опухоли (разд. [c.437]

Возможные трудности. Метод культивирования фибробластов сопряжен с рядом трудностей. Эти клетки плохо растут или вовсе не растут на химически определенных средах. Приходится добавлять сыворотку, содержащую полный набор необходимых питательных веществ. Как правило, для этого используют эмбриональную сыворотку теленка. К сожалению, очень трудно раз и навсегда стандартизировать условия культивирования необходимо постоянно контролировать и уточнять такие параметры, как pH, содержание глюкозы и др. [c.14]

Относительный уровень этого гликопротеида в клетках коррелирует со способностью к аллотрансплантации 6 гибридных клеточных линий (ТАЗ-На -f нормальные мышиные эмбриональные фибробласты), Пассирование клеток ТАЗ-St в организм больных пневмонией сингенных мышей в течение первой недели приводит к исчезновению с поверхности клеток эпигликанина и появлению клеток ТАЗ ММ [c.90]

Рестрикционный анализ показывает, что разные штаммы EHV-1 могут принадлежать как субтипу 1, так и субтипу 2. Первый связан с выкидышами у кобыл, хотя выделяют его и из респираторного тракта. Второй относится к вирусам респираторного типа и не связан с выкидышами [21—23]. Вирусы субтипа 1 размножаются во многих культурах. В нашей лаборатории мы обычно используем клетки линии RK13, хотя в других лабораториях предпочитают использовать клетки лошадей (например, эмбриональные фибробласты кожи лошадей). Кроме того, вирусы субтипа 1 успешно размножаются в культурах клеток L-M [24]. Некоторые штаммы субтипа 1 были адаптированы к росту на хомяках [25]. Вирусные изоляты субтипа 2 растут только в клетках лошадей. Используя метод 1, описанный в разд. 2.5.1, можно проводить очистку вирусов обоих субтипов. На рис. 10.7 показаны спектры полипептидов EHV-1 (субтипа 1), BMV, PRV, ВПГ-1 и ВПГ-2. [c.285]

При введении в первичные эмбриональные фибробласты крысы онкогенов, принадлежащих к тому или другому классу, фокуды морфологической трансформации получить не удается. Однако введение различных онкогенов методом котрансформации с доминантными маркерами устойчивости позволяет определить, какие признаки привносятся в нормальную клетку тем или иным онкогеном. Так, [c.226]

Селекция трансформантов в агаре. К числу признаков, которые 1гут быть селективными при введении в клетки онкогенных последо-тельностей, относится признак независимого от субстрата размно- ния. В связи с этим после переноса онкогенов, через 36 ч, первич-[0 эмбриональные фибробласты снимают смесью версена с трипси-м и клонируют в полужидком агаре. [c.229]

Трансформация эмбриональных фибробластов крысы двумя онкогенами. При введении двух онкогенов в первичные эмбриональные фибробласты крысы возможен отбор трансформантов по фокусам морфологической трансформации без введения доминантных маркеров устойчивости. Процедура получения морфологических трансформантов при обработке клеток кальцийфосфатным преципитатом ДНК такая же, как описано выше. Смесь двух плазмид, которыми трансформируют первичные эмбриональные фибробласты, растворяют в буфере Б и формируют преципитат, которым обрабатывают клетки. Суммарное количество ДНК на 60 мм чашку, в которой находится 3 10 клеток, не должно превышать 20 мкг. Через сутки клетки рассевают и, меняя каждые 3 сут среду, ожидают появление фокусов морфологической трансформации, которые формируются через 18—21 сут после обработки клеток преципитатом плазмидной ДНК. Затем фокусы выделяют с помощью титановых цилиндров и после размножения клеток определяют гибридизацией по Саузерну присутствие двух онкогенных последовательностей, вводимых в составе различных плазмидных векторов. Выделенные трансформантные клоны можно использовать для изучения различных аспектов канцерогенеза (in vitro и in vivo). [c.230]

Описай кальцийфосфатный метод переноса онкогенных последовательностей в составе плазмидной и тотальной ДНК из опухолевых клеток. Описан способ получения фокусов морфологической трансформации на NLH38 клетках и эмбриональных фибробластах крысы, а также введение онкогенных последовательностей котрансфекцией с доминантными маркерами устойчивости. Библиогр. 19 назв. [c.317]

ЭС клетки обладают высокой пролиферативной активностью и способностью в течение длительного времени в культуре поддерживаться в недифференцированном состоянии. Для сохранения недифференцированного фенотипа ЭС клеток в культуре требуется наличие фидерного слоя, который может быть представлен первичными эмбриональными фибробластами или перевиваемыми фибробластами мыши линии STO (Evans, Kaufman, 1981). [c.291]

Клеточная линия эмбриональных фибробластов мыши ЮТ 1/2 (10 Т с половиной) представляет собой весьма стабильную линию, клетки которой проявляют свойства фибробластов. Однако если клетки этой линии инкубировать в течение 24 ч в среде, содержащей 5-азацитидин (5-аза-С), то при высокой плотности культуры они начнут дифференцироваться в клетки хряща, жировые или мышечные клетки. (Обработка 5-аза-С снижает общий уровень [c.161]

В гибридных клетках человек-мышь, полученных в результате слияния ане-уплоидных Ь-клеток мыши и диплоидных эмбриональных фибробластов человека, 75-95% человеческих хромосом утрачиваются в процессе культивирования, причем их утрата носит случайный характер. Среди множества разнообразных гибридов всегда найдется клетка, сохравдвтая ту или иную хромосо.му человека. После размножения этой клетки можно провести анализ ферментов, активность которых связана с наличием именно данной хромосомы. Использование методов дифференциального окрашивания хромосом позволяет связать п ны с определенными локуса-ми хромосом, так как в гибридных клетках довольно часты хромосомные разрывы, перестройки, присутствие не целых хромосом, а отдельных фрагментов. [c.123]

Это представление подтверждается существованием стволовых клеток, сохраняющих некоторые черты эмбриональных клеток при каждом делении стволовой клетки образуется новая стволовая клетка плюс дифференцированная клетка. Последнее явление трудно объяснить только как реакцию на химические сигналы из окружающей среды. Согласно некоторым наблюдениям, клетки животных обладают ограниченным потенциалом деления [176, 177]. Например, нормальные диплоидные фибробласты человеческого эмбриона при выращивании в культуре делятся примерно 50 10 раз, после чего погибают независимо от условий культивирования. Фибробласты, полученные от людей старшего возраста, погибают после меньшего числа клеточных деле яйй. АнаЛОгнтаым йбразом быс трее norti6atdlf в культуре клетки жи- [c.360]

Важным достижением в этой области оказалась разработка метода культивирования фибробластов эмбриона с целью проведения внутриутробной (пренатальной) диагностики наследственных нарушений метаболизма (дополнение 1-Г). Легче всего удается культивировать эмбриональные или раковые клетки, но в определенных условиях можно получить культуры многих других тканей. Следует иметь в виду, что клетки, которые лучше всего растут, не вполне нормальны например, широкоизвестная линия клеток HeLa (клеток рака человека, которых выращивают уже много лет в лабораториях всего мира) содержит 70—80 хромосом вместо обычных 46. [c.55]

Коллаген [30]—волокнистый белок, содержащийся в коже, сухожилиях, хрящах, костях и зубах. Коллаген внутриклеточно синтезируется в фибробластах в виде предшественника, проколлагена с м. м. цепи 125 000—130000. Его отличие от коллагена заключается в продлении jV-концевого сегмента, содержащего дисульфидные связи н триптофан. Превращение проколлагена в коллаген осуществляется вне клетки ферментом проколлагенпептидазой, удаляющей содержащий цистин и триптофан iV-концевой сегмент посредством расщепления связи X-Glu или X-Gln, в результате чего на N-конце коллагена образуется остаток пирролидон-2-карбо-новой-5 кислоты. Об этой протеазе известно мало, за исключением того, что она содержит важный для активности металл и не является ни сериновой , ни тиольной протеиназой. Наследственное заболевание крупного рогатого скота, дерматоспараксис, объясняется отсутствием этой протеолитической стадии. Коллаген состоит из трех полипептидных цепей, в каждой из которых содержится около 1000 аминокислотных остатков. Цепи образуют тройную правую спираль, причем на каждый третий остаток приходится одна межмолекулярная водородная связь >NH. .. 0=С<. У N- и С-концов коллагена расположены неспиральные телопептидные участки. Зрелый коллаген содержит два типа цепей, al и а.2, образуя в тройной спирали структуру состава (а1)га2. В эмбриональном коллагене, а также в коллагене, образующемся на ранних стадиях заживления раны, содержится только один тип цепей (а1)з. [c.573]

Чтобы заразить рекомбинантным ретровирусом эмбриональные клетки, в культуральную емкость с инфицированными фибробластами, продуцирующими рекомбинантный вирус, помещают восьмиклеточную морулу (группа бластомер, возникшая после равномерного дробления оплодотворенного яйца), освобожденную от яйцевой оболочки. Морула инфицируется и после достижения стадии бластоцисты ее вводят в матку псевдобеременной матери. Часть бластоцист может погибнуть, а часть нормально развивается и в соответствующие сроки трансформируется в трансгенное потомство, которое затем подвергается тщательному генетическому анализу и может использоваться для выведения трансгенных линий. [c.585]

Подобно большинству тканей, печень-это смесь клеток различных типов. Кроме гепатоцитов и эндотелиальных клеток, выстилающих синусоиды, в печенн имеются специализированные макрофаги [купферовы клетки), которые поглощают твердые частицы из кровотока и разрушают изношенные эритроциты есть также небольшое число фибробластов, образующих рыхлый соединительнотканный остов (рис. 16-13). Клетки всех этих типов способны к делению. Для того чтобы произошла полноценная регенерация, их размножение должно быть соответствующим образом скоординировано. В ходе эмбрионального развития создается сбалансированная и хорошо организованная смесь клеток, а при регенерации во взрослом организме этого можег не произойти. Например, если многократно повреждать печень четыреххлористым углеродом или алкоголем с такими короткими интервалами, что гепатоциты не будут успевать полностью восстанавливаться, преимущество могут получить фибробласты в этом случае печень будет необратимо забита излишней соединительной тканью, и для роста гепатоцитов останется очень мало места, даже после устранения токсического агента. Такое состояние, называемое циррозом, часто встречается у хронических алкоголиков. [c.146]

Таким образом, стало возможным опреде.дять, с какой частотой вирусная инфекция приводит к гибели клеток, а с какой — к их трансформации. Создается впечатление, что в оптимальных условиях при инфицировании вирусом полиомы в количестве около 1000 бляшкообразующих единиц около 5% инфицированных эмбриональных клеток хомячка и 0,5% инфицированных эмбриональных клеток крысы претерпевают трансформацию изменяется внешний вид клетки, изменяются ее поверхностные свойства и, наконец, клетка становится транснлантабельной [555]. В частности, трансформированные фибробласты цыпленка или клетки почки новорожденного хомячка (два наиболее часто используемых типа клеток) теряют свои характерные контактные ингибиторные свойства, удерживающие [c.268]

Соединительная ткань пронизывает все тело позвоночных. В конечности соединительная ткань формирует кости и хрящи, сухожилия и связки, кожу, оболочк мыщц, внешние слои стенок кровеносных сосудов и оболочки нервов и промежуточную ткань, связывающую воедино все эти компоненты. Эти формы соединительной ткани образованы фибробластами и близкородственными клетками, которые погружены в обогащенный коллагеном внеклеточный матрикс, секретируемый ими. И все эти разнообразные клетки развиваются из мезенхимы недифференцированной зародышевой ткани, заполняющей зачаток эмбриональной конечности ее нроисхождение можно проследить вплоть до мезодермы боковой пластинки, соседствующей с сомитами раииих эмбрионов (см. рис. 16-15). Кроме покрывающего конечность эпидермиса, все остальные комноненты конечности являются производными популяции мигрирующих клеток, ие являющихся производными боковой пластиики Прежде чем достигнуть места назначения и принять участие в формировании структуры взрослого животного, эти клетки должны совершить длительное путешествие по эмбриональной соединительной ткани. [c.139]

Другие факторы способны вызвать все три компонента реакции эндотелиальных клеток. Таковы, например, кислый фактор роста фибробластов (кислый ФРФ) и основной фактор роста фибробластов (основной ФРФ). Эти два белка, которые были независимо выделены и очищены из нескольких различных источников и поэтому известны и под разными другими названиями, сходны по аминокислотным последовательностям (55% гомологии). Помимо сильно выраженного действия их на эндотелиальные клетки они стимулируют пролиферацию фибробластов и клеток ряда других типов, а также служат важными регуляторами раннего эмбрионального развития (разд. 16.2.3). Какие клетки их выделяют, не вполне ясно. Клетки многих типов, включая макрофаги, тучные клетки и жировые клетки, могут выделять и другие вещества, действующие как ангиогенные факторы в период заживления, роста ткани или воспаления. Ангиогенез, так же как и иные процессы клеточной пролиферации, регулируется не каким-то одиночным сигналом, а сложным (и, возможно, избыточным) комплексом сигналов. [c.167]

Трансформированные клетки отличаются от нормальных и своим поведением в культуре они слабо прикрепляются к субстрату, не распластываются, у них не образуется упорядоченных пучков внутриклеточных актиновых филаментов (разд. 10.5.4), и они растут до значительно больших плотностей, чем нормальные клетки (разд. 11.1.8). Если к культуре трансформированных клеток, синтезируюших сравнительно мало фибронектина, добавить большое количество этого белка, клетки быстро прилипают к субстрату, распластываются и образуют упорядоченные пучки актиновых филаментов (рис. 12-65). Эти клетки выглядят как нормальные фибробласты, но по-прежнему размножаются до аномально высокой плотности. Видимо, фибронектин способствует клеточной адгезии, но непосредственно не контролирует пролиферацию клеток. Сейчас показано, что очишенный фибронектин помогает связыванию клеток различного типа с другими клетками, а также с коллагеном и иными субстратами. Так как высокие концентрации фибронектина были найдены в области миграции эмбриональных клеток, полагают, что этот гликопротеин влияет на передвижение клеток in vivo, изменяя их адгезивность. [c.237]

Опухолевые клетки (асцитные или диссоциированные из солидных опухолей) высевают на монослой фидерных фибробластов (разд. 8.1.5). Через несколько дней в культуре можно видеть много различных видов дифференцированных клеток, и в том числе колонии эмбриональных клеток. При повторном пересеве эти клетки доминируют, но возможно, что проще отобрать их вручную и пересеять на фидерный слой (Martin, Evans, 1975а). [c.218]

Смотреть страницы где упоминается термин Клетка эмбриональные фибробласты: [c.255] [c.200] [c.14] [c.162] [c.45] [c.89] [c.135] [c.193] [c.230] [c.230] [c.231] [c.342] [c.343] [c.15] [c.228] [c.155] [c.256] [c.260] [c.291] [c.277] [c.357] [c.54] [c.137] [c.190] [c.129] [c.7] [c.109]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология