Гексануклеотидных праймеров метод

Однако, для того чтобы все существующие в M S сайты узнавания гексануклеотидных рестрикционных эндонуклеаз были пригодны для использования их в качестве сайтов для молекулярного клонирования, необходимо, чтобы они были уникальными, т.е. не встречались больше в остальной последовательности вектора. Кроме действительно изначально уникальных, для некоторых ферментов имелись дополнительные участки узнавания в других местах векторной молекулы. Первые векторы, как семейства одноцепочечных фаговых векторов М13тр, так и семейства pU , подвергали химическому мутагенезу с целью изменения отдельных нуклеотидов в нежелательных сайтах узнавания тех или иных рестрикционных эндонуклеаз и в результате кропотливого анализа отбирали требуемые варианты. В последующем, с появлением и разработкой метода сайтнаправленного мутагенеза, осуществляемого с помощью специально синтезированного олигонуклеотидного праймера, несущего измененный неспариваемый нуклеотид, процедура удаления ненужных сайтов узнавания рестрикционных эндонуклеаз существенно упростилась. [c.217]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология