Приготовление препаратов для люминесцентной микроскопии

Приготовленные препараты высушивают с помощью фильтровальной бумаги и изучают в люминесцентном микроскопе сначала при помощи сухого объектива (40х), а затем, поместив на препарат каплю нефлюоресцирующего масла, с помощью иммерсионного объектива (90х). При этом обращают внимание не только на наличие зеленого или зелено-желтого свечения, но и его интенсивность, характер распределения свечения в изучаемой клетке. [c.76]

При прямом иммунофлюоресцентном методе Кунса специфические флюоресцирующие антитела, связавшиеся с микробными антигенами, образуют комплексы, которые светятся при люминесцентной микроскопии препаратов (рис. 56). Недостатком прямого метода Кунса является необходимость приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток против каждого изучаемого антигена. [c.115]

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ [c.112]

Методика постановки непрямой РИФ. На предметное стекло наносят АГ — бледные трепонемы (штамм Никольса), полученные из тестикулярной ткани зараженного кролика в таком количестве, чтобы в поле зрения попадало 50—60 микроорганизмов. Мазки высушивают на воздухе и фиксируют в ацетоне в течение 5 мин. Сыворотку больного истощают взвесью непатогенных трепонем штамма Рейтера (по типу реакции Кастеллани) или разводят 1 200 (для предотвращения перекрестных реакций), затем наносят ее на приготовленные препараты, которые выдерживают во влажной камере при 35 °С в течение 30 мин (1-я фаза). Затем мазки промывают в течение 10 мин в забуференном ИХН и высушивают на воздухе. После этого на препарат наносят каплю флюоресцирующей сыворотки против глобулинов человека и инкубируют во влажной камере при комнатной температуре в течение 30 мин (2-я фаза). Мазки промывают в двух порциях забуференного ИХН, высушивают и просматривают в люминесцентном микроскопе, отмечая наличие и яркость специфического желто-зеленого свечения трепонем (см. цв. вклейку, рис. 23). [c.229]

Для приготовления постоянных препаратов флуорохромированные срезы или фиксированные мазки на предметных стеклах быстро промывают в дистиллированной воде или буфере, проводят через 96°-ный спирт, карбол-ксилол и заключают в акриловый клей, полистирол или винилнн. Акриловый клей представляет собой раствор метакриловой смолы, поли-меризованной в ксилоле. Он быстро высыхает и вполне прозрачен для видимого и ультрафиолетового света до 300 ммк. Его применение для люминесцентной микроскопии было предложено Бухман с сотрудниками [7]. Шалумович рекомендует заключать в сахарный сироп [22, доп. сп.]. [c.313]

Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженньк клеток. Включения имеют различную форму и размеры от 0,25 до 25 мкм. Они представляют собой места скопления вирусньпс частиц или реакцию клетки на присутствие в ней вируса и могут быть выявлены в препаратах, приготовленных из зараженной ткани и окрашенных по Романовскому—Гимзе или флюорохромами. В последнем случае используют люминесцентную микроскопию. [c.60]

Метод учета численности бактерий в почве при помощи люминесцентной микроскопии по Звягинцеву и Кожевину дает еще более достоверный результат по сравнению с методом Виноградского. Суть его в том, что приготовленные из почвенной суспензии препараты окрашивают специальным красителем акридином оранжевым (флуорохро-мом). Окрасившиеся в ярко-зеленый цвет клетки хорошо заметны на темном или красном фоне почвенных частиц и препарата, причем микроскопия в отраженном свете позволяет учитывать и адсорбированные клетки, которые, как правило, не видны в проходящем свете. [c.114]

Для микроскопии на препарат наносят каплю воды и покрывают покровным стеклом. Приготовленный препарат не должен содержать пузырьков воздуха, лишнюю воду снимают фильтровальной бумагой. Препарат просматривают на люминесцентном микроскопе МЛт2 или МЛ-4 (фильтры ФС-1-2, ЖЗС-19, ЖС-18, объектив 90 Лх, окуляры 4х или 5х). [c.114]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология