Иммуноферментный анализ кортизола

Иммуноферментный анализ кортизола [c.266]

Методика иммуноферментного анализа. Смешивают в стеклянных пробирках (16X100 мм) по 20 мкл стандартных растворов или образцов плазмы с 30 мкл буфера А. Осторожно перемешав, прогревают растворы в кипящей водяной бане 10 мин. После охлаждения добавляют 0,4 мл буфера Б и 0,1 мл раствора конъюгата. Растворы перемешивают и добавляют 0,1 мл антисыворотки против кортизола в разведении 1 500 (конечное разведение 1 3000) и инкубируют при комнатной температуре в течение 60 мин. После добавления 100 мкл нормальной сыворотки кролика, разведенной в 40 раз, приливают 100 мкл раствора козьих антител против иммуноглобулинов кролика. Смесь перемешивают на вортексе, инкубируют 2 ч при 4°С, затем центрифугируют 10 мин при 2000 g. Осадок дважды промывают буфером Б, Активность фермента в осадке определяют с использованием в качестве субстрата о-нитрофенил-p-D-галактоз и да. Время инкубации при измерении ферментативной активности 1 ч. Количество образовавшегося к концу реакции о-нитрофенола определяют спектрофотометрически при 420 нм. [c.268]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология