Иммуноферментный анализ

В разделе изложены методы иммунизации животных и гибридизации клеток для получения поликлональных и моноклональных антител, методы получения препаративных количеств антител и их очистки, способы введения ферментных меток в антитела и антигены для использования в иммуноферментном анализе, способы введения радио-изотопных меток в антитела для радиоиммунного анализа, методы изучения антигенных свойств ферментов [c.307]

На разных уровнях работы используется разный способ анализа. Так, при проведении скрининговых массовых определений наличия наркотических веществ наиболее перспективно и экономически выгодно применять экспресс-анализы на полосках. Полученные в этом случае отрицательные результаты не требуют никаких дополнительных подтверждений другими методами. При обнаружении наркотического вещества в анализируемой пробе в дальнейшем для окончательного решения вопроса необходимо использовать подтверждающие альтернативные методы. К ним относятся физико-химические способы, основанные на использовании специальных приборов, и иммунохимические методы, в частности, гетерогенный иммуноферментный анализ. [c.199]

В иммуноферментном анализе используются поли- и моноклональные антитела как по отдельности, так и вместе. Относительная легкость получения поликлональных антител из антисывороток иммунизированных животных в ряде случаев дает возможность пренебречь их гетерогенностью. Однако разработка метода получения моноклональных антител — продуктов гибридных клеток — дала им огромные преимущества в иммунохимическом анализе в связи с уникальными свойствами, выгодно отличающими их от антисывороток. Использование моноклональных антител в иммуноферментном анализе дает возможность работать с практически неограниченным источником антител, однородных по молекулярным и иммунологическим свойствам. С их появлением открылись новые возможности для структурного изучения антигенов. Это связано с тем, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами, связываются со специфическим участком на поверхности белковой молекулы — антигенной детерминантой и могут быть использованы в качестве селективных зондов на определенные структурные участки. [c.306]

Рис. 1.28. Иммуноферментный анализ (твердофазный вариант) а определение неизвестных антител (серодиагностика) б — определение неизвестных антигенов (индикация)

АМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЕ ДАТЧИКИ В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕ [c.506]

ИФА. Иммуноферментный анализ относится к числу наиболее чувствительных и специфических методов серологического исследования при паразитозах. Метод с успехом применяется для диагностики эхинококкоза, альвеококкоза, трихинеллеза, токсока-роза, описторхоза, фасциолеза, шистосомоза Мансона. В перспективе — применение этой реакции при филяриатозах. [c.386]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

Л. а. используют в иммунохим. анализе для определения антител, гормонов, лек. препаратов, вирусных и бактериальных антигенов по концентрации комплекса антиген-антитело. При этом в иммунном флуоресцентном анализе к антителу непосредственно присоединяют флуоресцирующие в-ва, напр. РЗЭ, флуоресцирующие красители (чувствительность метода 10" моль/л), а в иммуноферментном анализе к антителу присоединяют фермент и в результате ферментативной р-ции, сопровождаемой биолюминесценцией, определяют ферментативную активность (чувствительность метода 10" моль/л). [c.614]

Созданы и применяются в производстве высокочувствительные диагностические препараты на основе метода ИФА (иммуноферментного анализа), ДНК-зондов, внедрения полимеразной цепной реакции (ПЦР).Используются моноклональные антитела, полученные методом гибридомной технологии. Получены генетически трансформированные кролики с геном асРНК, устойчивые к вирусам лейкоза, а также трансгенные кролики с геном альфа-2 интерферона. Разработана рекомбинантная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота на основе оспененного вектора. На культуре клеток нарабатывается антиген и производится диагностика лейкоза крупного рогатого скота. Генно-инженерные вакцины против ящура и сибирской язвы производятся в объемах, обеспечивающих потребности в них России, стран СНГ и ряда других государств мира. [c.428]

Для того чтобы продемонстрировать принцип иммуноферментного анализа, приведем результаты анализа иммуноглобулина, специфичного к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) в сыворотке крови пациентов. Этот показатель является очень важным как минимум по двум аспектам. Применительно к человеку, укушенному клещом, результат анализа показывает, достаточно ли устойчив человек к энцефалиту. А в случае использования крови здоровых доноров этот показатель свидетельствует о тйм, содержит ли кровь достаточное количество антивирусных антител, для того чтобы быть использованной для приготовления антивирусного иммуноглобулина. Последний может быть использован для введения человеку, укушенному клещом, для предотвращения развития инфекции. Известно, что поверхностный вирусный белок Е является основным антигеном ВКЭ. Этот белок можно достаточно прочно сорбировать на поверхности полистироль-ной пробирки. Если взять его в избытке, достаточном для количественного связывания антител к белку Е в образце, последние будут сорбированы практически полностью. После удаления образца добавляется конъюгат стафилококкового [c.258]

Использование твердых носителей для иммобилизации антител с последующим специфическим связыванием определяемого соединения на сорбенте и идентификацией образовавшихся нммунокомплексов с помощью меченных ферментами компонентов лежит в основе методов твердофазного иммуноферментного анализа (метод гетерогенного ИФА). [c.115]

В пособии (1-е изд.— 1979 г.) рассматриваются современные методы аналитической биохимии, основы препаративной энзимологии, методы изучения кинетики и механизмов регуляции ферментативных процессов, приемы иммобилизации ферментов и иммуноферментного анализа, а также методы, используемые при изучении метаболизма митохондрий и биоэнергетики. [c.2]

Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод основан на использовании в качестве метки АТ ферментов, способных разлагать субстрат и приводить к образованию окрашенных продуктов (хромогена). Конъюгированные с ферментом АТ сохраняют способность соединяться с гомологичным АГ. Интенсивность окраски хромогена соответствует количеству образовавшихся комплексов АГ-АТ + фермент. [c.77]

Берут 96-луночные микропланшеты для иммуноферментного анализа (ИФА) с плоским дном. Количество микропланшетов определяется числом исследуемых клонов гибридом. Раствор антигена в концентрации 1 мг/мл вносят в лунки микропланшетов в объеме 50 мкл [c.320]

Большое внимание уделено экспресс-диагностике инфекционных болезней и новейшим методам иммуно- и генодиагностики, которые начинают широко применяться в лабораторной практике. Среди них иммуноферментный анализ, иммуноэлектронная микроскопия, реакция иммунофлюоресценции, радиоиммуноло- [c.5]

Используют П. в аналит. целях (напр., для определения микроколичеств Н2О2, ароматич. аминов, загрязнений в окружающей среде), а также в иммуноферментном анализе. Данные по пероксидазной активности учитывают при селекции растений (чем выше эта активность, тем устойчивее к инфекции растения). Перспективно применение П. для селективного окисления орг. соединений, а также для глубокой очистки сточных вод от ароматич. соединений. [c.489]

Для использования сэндвич-гибридизации в зонд нужно ввести спехщальные группы, обладающие высоким сродством к вспомогательному белку, несущему метку. Как и в иммуноферментном анализе, с этой целью часто используют биотин. Его легко присоединить к олигонуклеотидам или ввести в молекулу ДНК мягкой обработкой зонда. Например, небольшое число цитозиновых остатков можно превратить в производные, несущие алифатическую аминогруппу. С этой целью зонд обрабатывается этилендиамином или гексаметилен диамином в присутствии бисульфита натрия в соответствии с реакцией [c.262]

Иммуностимуляторы 2/426, 427 Иммуносупрессоры 3/595 Иммунотоксикология 2/427 Иммунотропные средства, см. Имму-нпмо )улирующие средства Иммуноферментные электроды 2/522 Иммуноферментный анализ 2/423, 1291 3/970 5/)51, 153 Иммуноцитохимия 5/770 Иммунохимия 2/427, )41, )87, 293, 395, 425, 426, 428, 429, 660, )219 3/929 5/770 Импакторы 4/281 Импеданс Варбурга 2/429 5/919 Геришера 5/919 Фарадея 5/919 [c.611]

Если ген нужен для производства программируемого им белка, то с помощью аналогичных приемов его встраивают в специальным образом сконструированные плазмиды, в которых ген примыкает к эффективно работающему промотору РНК-полимеразы. При введении таких плазмид в соответствующие клетки последние начнут интенсивно нарабатывать информационную РНК, соответствующую этому гену, а с ее помощью и конечный продукт гена — белок. Векторы, используемые для этой цели, называют экспрессирующилт. Отбор клеток, которые экспрессируют встроенный ген, лучше всего вести непосредственно по накоплению продукта экспрессии в клопах, например используя радиоимму1Юанализ или иммуноферментный анализ с мечеными антителами к продуцируемому геном белку. [c.304]

МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА В ОТНОШЕНИИ РЕСНИРАТОРНО- СИНЦИТИАЛЬНОГО ВИРУСА [c.420]

Существует ряд методов, позволяющих ковалентно связать фермент с олигону-клеотидным зондом. В качестве примера 1 ожно рассмотреть пол гчение конъюгата олигонуклеотида-зонда с щелочной фосфатазой из кишечника теленка, уже упоминавшейся при описании иммуноферментного анализа. Из олигонуклеотида нетрудно получить производное [c.261]

Высокая специфичность иммуноферментного анализа обеспечивается примеиеиием [c.614]

Для диагностики висцерального лейшманиоза разработана тест-система для ИФА при этом в качестве антигена используется экстракт из L. donovani. Иммуноферментный анализ является более чувствительным, специфичным и экономичным по сравнению с РИФ. Диагностический титр ИФА — 1 400 и выше. [c.362]

Применение термотерапии в сочетании с меристемной культурой позволяет оздоровить более 70 % растений-регенерантов хмеля от вирусного хлороза, 90 % растений земляники, 25 % — черной и красной смородины, 50 % — малины, более 80 % — картофеля. Проверку растений на наличие вирусов, как правило, проводят с помощью иммуноферментного анализа, электронной микроскопии и травянистых растений-индикаторов. Другой способ, применяемый для освобождения растений от вирусов,— хемотерапия. Он заключается в добавлении в питательную среду, [c.117]

При наличии гибридов производят смену среды Дальбекко (без аминоптерина) в течение последующих 14 дней и, наконец, добавляют минимальную модифицированную среду Дальбекко. После этого следует скрининг (от англ. s reen — решето, хфосеивать) гибридных клеток по образованию антител, используя серологические реакции, радиоиммунный, иммунофлуоресцентный или иммуноферментный анализ. Более чувствительный из них радиоиммунный метод. [c.576]

Непреходяще значение МкАТ в диагностике, в том числе — при использовании иммуноферментного анализа в различных его вариантах, включая метку коллоидного золота. Например, чтобы локализовать тироксин-секретирующие клетки в образце ткани [c.580]

Иммобилизованные ферменты применяют для автоматического анализа биологических субстратов и лекарственных веществ как покрытые электроды (электрохимические датчики, на которые нанесен слой иммобилизованного фермента) в методах сухой химии (слои реагентов и ферментов, при прохождении через которые происходит реакция и образуется окрашенное вещество). 2. Иммуноферментный анализ используют для определения природных лекарственных веществ и ксенобиотиков. Суть его в том, что молекула фермента, соединенная с антигеном или антителом, служит индикатором реакции антиген - антитело в среде. Измеряя активность фермента, можно сказать, сколько молекул антигена вступило в иммунохими-ческую реакцию с антителом. 3. Биотехнология лекарственных препаратов предполагает использование иммобилизованных ферментов в синтезе лекарств. За счет специфичности ферментов в оптималь- [c.478]

Смотреть страницы где упоминается термин Иммуноферментный анализ: [c.302] [c.303] [c.198] [c.201] [c.204] [c.85] [c.538] [c.482] [c.3] [c.74] [c.19] [c.50] [c.122] [c.67] [c.74] [c.139] [c.151] [c.152] [c.488] [c.121] [c.599] [c.316]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология