ДНК, включение в векторные плазмиды

Включение фрагмента чужеродной ДНК в векторную плазмиду [c.195]

Впоследствии оказалось, что методики, использованные ранее для получения эффективной трансформации протопластов Ti-плазмидой, обеспечивают и оптимальное поглощение малых плаз. иидных векторов [9, 11]. В настоящее время эндоцитоз с помощью ПЭГ и электропорация могут быть использованы для эффективного включения малых векторных плазмид в протопласты с частотой трансформации от 10 до 2-10 2 >[15, 31, 38]. Введение векторной ДНК в синхронизированные протопласты, находящиеся в S-фазе и митозе, повышает эффективность трансформации еще в 3—5 раз 25, 30]. Высказано предположе- [c.198]

Основным свойством интегрирующих векторов является их способность стабильно встраиваться в геном клетки-хозяина. Это становится возможным благодаря наличию в таких векторах последовательностей нуклеотидов, гомологичных последовательностям геномной ДНК. В результате функционирования общей системы рекомбинации происходит объединение хромосомной и плазмидной ДНК интегрирующего вектора и стабильное включение всей векторной плазмиды в хромосому. Примером интегрирующего вектора служит плазмида pFH7 В. subtilis (рис. 12, а). Векторная плазмида содержит фрагмент ДНК умеренного бактериофага SP(3 и после попадания в клетки В. subtilis, лизогенные по данному бактериофагу, эффективно интегрируется в профаг. Поскольку плазмида содержит ген устойчивости к хлорамфениколу at, клетки приобретают этот признак. Индукция профага приводит к образованию фаговых частиц, трансдуцирующих такую плазмиду и ассоциированный с ней признак устойчивости к хлорамфениколу. Интеграция плазмиды SPp в бактериальную хромосому происходит по механизму гомологичной рекомбинации с участием гена гесЕ. Способность к интег- [c.101]

Влияние терминатора транскрипции вектора. Наличие действенного терминатора транскрипции позади экспрессируемого рекомбинантного гена является еще одним условием эффективной экспрессии рекомбинантного белка. В том случае, если РНК-по-лимераза не прекращает синтеза РНК на границе рекомбинантного гена, может образоваться полицистронный транскрипт, в котором сайты инициации трансляции векторной плазмиды будут конкурировать за соответствующие участки целевой рекомбинантной мРНК. В частности, этот эффект может иметь место при включении в полицистронную мРНК последовательности гена Ыа, определяющего устойчивость клеток к ампициллину. [c.119]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология