Плазмиды интеграция

Рис. 15.3. Схема спасения линейной ДНК вируса ядерного полиэдроза калифорнийской совки плазмидой интеграции за счет рекомбинации молекул ДНК по областям гомологии

К М.г.э. прокариот относят также умеренные фаги. Х-Фаги (лямбдоидные фаги) обычно встраиваются в одно место хромосомы, но при определенных условиях могут располагаться и в др. участках генома, ц-Фаги способны включаться в любые места бактериальной хромосомы, а также в ДНК мн. др. фагов и плазмид. Интеграция лямбдо-идных фагов обеспечивается ферментной системой, состоящей из клеточных белков и белков, кодируемых геномом фага. [c.79]

Интеграция — результат рекомбинации между гомологичными последовательностями плазмидной ДНК и хромосомы клетки-хозяина. Интегрированная копия плазмидного вектора оказывается фланкированной прямыми повторами дупликации подвергается участок взаимной гомологии плазмидной и хромосомной ДНК- Рис. 7.2 иллюстрирует рекомбинационные события в области гена leu ine 2. У многих трансформантов наблюдается множественная интеграция плазмид в виде тандемно повторяющихся копий (рис. 7.2). Часть интегративных рекомбинационных событий происходит как двойной кроссинговер. Эта схема может привести к замещению участка хромосомной ДНК на гомологичный участок плазмидной ДНК без интеграции векторной части рекомбинантной плазмиды. Интеграция может произойти Б любом месте генома при условии, что в этом месте находится последовательность, гомологичная участку плазмидной ДНК-Единственное исключение составляет геномный сайт плазмидного селективного маркера. [c.213]

Встройку чужеродных генов в геном клетки осуществляют с помощью специализированных плазмид, называемых векторами интеграции. Классическим вектором данного типа является плазмида, не способная реплицироваться в исследуемых клетках, но имеющая в своем составе сегмент ДНК, гомологичный определенному району бактериальной хромосомы. Многочисленные эксперименты показали, что плазмиды интеграции способны с высокой эффективностью рекомбинационно встраиваться в геном В. subtilis. При этом интеграция является гесЕ-зависимой и в большинстве изученных случаев происходит по модели Кэмпбелла, т. е. кольцевая молекула ДНК рекомбинирует с гомологичным участком бактериальной хромосомы в одной точке (участке) и целиком встраивается в геном клетки. [c.257]

В гл. 12 отмечалось, что у дрожжей плаз-мвды интеграции рекомбинационно встраиваются в хромосомы преимущественно по областям гомологии, т. е. за счет системы общей рекомбинации гомологичных последовательностей ДНК. Напротив, в клетках млекопитающих экзогенные молекулы ДНК интегрируются в большинстве случаев за счет негомологичной рекомбинации, а встройка по области гомологии происходит крайне редко. Предположили, что такой эффект обусловлен различиями в размере генома клеток млекопитающих и дрож-жей-сахаромицетов. У первых геном примерно в 200 раз больше, т. е. относительное содержание 5Шикального локуса во столько же раз меньше. Для проверки этой гипотезы X. Женг и Дж. Уилсон (1990 г.) использовали две культуры клеток — с единичным и амплифицирован-ным до 800 копий генами дигидрофолатредуктазы — и плазмиду интеграции, у которой в со- [c.342]

Pu . 15.2. Нуклеотидная последовательность плазмид интеграции в районе встроенного в ген полиэдрина ДатШ-линкера. Инициаторный и терминаторный триплеты обведены рамкой. Последовательность линкера подчеркнута. Пробелы в последовательностях обозначают делецию [c.419]

Таблица 15.1. Экспрессия гена гемагглютинина вируса гриппа гибридными бакуловнрусами, полученными с помощью плазмид интеграции

Схема, объясняющая полученные результаты, представлена на рис. 15.3. ДНК вируса ядерного полиэдроза способна реплицироваться лишь в кольцевой форме. Поэтому после котрансфекции гидролизованной линейной вирусной ДНК и плазмидой интеграции, перекрывающей это место гидролиза, выживают (спасаются) только те вирусные геномы, которые в клетке смогли замкнуться в кольцо. Существенная часть вирусных молекул переходит в кольцевую форму в результате их рекомбинации с плазмидой. [c.423]

Целевые гены встраивают под контроль сильного промотора гена полиэдрина в плазмиду интеграции pFasffla (рис. 15.6), которая несет также детерминанты устойчивости к гента-мицину и ампициллину. После трансформации [c.426]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология