Нуклеотидная последовательность гена интерферона

Рис. 127. Аминокислотная последовательность а-интерферона человека и нуклеотидная последовательность соответствующего гена.

Как показал анализ нуклеотидной последовательности гена ИФр, в нем присутствуют три остатка цистеина, и один из них или несколько, возможно, участвуют в образовании дисульфидных связей, приводящих к образованию димеров и олигомеров в клетках Е. соИ, но не в клетках человека. Было высказано предположение, что замена одного или нескольких цистеиновых кодонов на сериновые приведет к синтезу интерферона, не образующего олигомеров. Серин бьш выбран потому, что его структура сходна со структурой цистеина за исключением того, что вместо серы он содержит кислород и поэтому не может образовывать дисульфидные связи. [c.170]

Экспрессия любого эукариотического гена с целью получения нативного белка требует использования структурной части гена в сочетании с соответствующими нуклеотидными последовательностями, которые распознаются ферментами клетки-хозяина как эффективные сигналы инициации транскрипции, трансляции, терминации трансляции и, возможно, терминации транскрипции. Сконструированный нужным образом гибридный ген, содержащий регуляторную область бактериального происхождения и структурную область гена человеческого интерферона, встраивают в плазмиды, способные автономно реплицироваться и стабильно поддерживаться в процессе роста микроорганизмов (рис. 38). [c.193]

В генетической инженерии с целью получения белков в достаточных количествах и с заданными свойствами (например, для генотерапии наследственных и соматических болезней) широкое применение получили эндонуклеазы рестриктазы, катализирующие расщепление молекулы двухцепочечной ДНК по специфическим нуклеотидным последовательностям внутри цепи. Рестриктазы узнают определенные 4-7-членные последовательности, вызывая, таким образом, разрывы в определенных сайтах цепи ДНК. При этом образуются не случайные последовательности, а фрагменты ДНК строго определенной структуры с липкими концами (рекомбинантные ДНК), используемые далее для конструирования гибридных молекул и получения генно-инженерной, биотехнологической продукции (например, инсулина, гормона роста, интерферона, вакцин против вируса гепатита В, СПИДа и др.). [c.481]

Вскоре была определена нуклеотидная последовательность вставки клона Hif-2h и на его основании аминокислотная последовательность, кодируемая внутри открытой рамки считывания. Эта последовательность содержала 189 аминокислот. К тому моменту стала известна первичная структура N-концевого участка одного из лейкоцитарных интерферонов человека, выявленная путем анализа высокоочищенного белка. Из сравнения аминокислотных последовательностей стало ясно, что первая аминокислота зрелого интерферона соответствует 24-му кодону клонированной последовательности, т. е. интерферон Hif-2h (названный интерфероном al) синтезируется в виде предшественника и при созревании и секреции из клеток отщепляет сигнальную последовательность длиной в 23 аминокислоты. Сам зрелый интерферон al содержит 166 аминокислотных остатков. Далее оказалось, что существует различие в пяти аминокислотных остатках из 20 между N-концевой последовательностью интерферона al и последовательностью лейкоцитарного интерферона, которую определили путем анализа из фракций высокоочищенного белка. Вскоре Вейсман с сотрудниками клонировали еще один ген лейкоцитарного интерферона (названный интерфероном о2, или оА) и определили его нуклеотидную последовательность. Соответствующая ей аминокислотная последовательность содержала 165 аминокислот и была сходна, но не идентична последовательности интерферона оА. Из этих результатов стало ясно, что имеется по крайней мере три разных лейкоцитарных а-интерферопа. [c.192]

А, которые содержали хромосомные последовательности генов интерферона. В результате анализа 240 тыс. клонов выделили 10 клонов, 8 из которых синтезировали в Е. соН (хотя и с низкой эффективностью) лейкоцитарный интерферон — от 3 тыс. до 50 тыс. единиц активности на 1 л бактериальной культуры. Для одного клона была расшифрована нуклеотидная последовательность вставки и показано отсутствие в гене интерферона интронов. [c.160]

В верхней части приведены нуклеотидная и аминокислотная последовательности, соответствующие месту стыка регуляторной области и гена зрелого интерферона, который начинается с остатка цистеина ( YS) стрелка показывает направление транскрипции [c.202]

Тогда наступила очередь второго способа — чисто химического. По аминокислотной последовательности была построена нуклеотидная последовательность гена интер-(Ьерона, и этот ген был синтезирован. Его опять же встроили в плазмиду и получили еще один штамм, вырабатывающий интерферон. [c.124]

Чтобы создавать рекомбинантные ДНК, несущие желаемый ген, необходимо прежде всего располагать этим геном. Для этого используют три основных способа. Во-первых, если известна первичная структура белка, получение которого желательно осуществить методами генетической инженерии, можно, основываясь на генетическом коде, построить нуклеотидную последовательность, программирующую этот белок, и осуществить химико-ферментативный синтез гена. Так, например, были осуществлены синтезы нескольких генов, кодирующих различные интерфероны. Во-вторых, можно выделить из тканей, в которых происходит экспрессия гена, информационные РНК, среди которых должна присутствовать и мРНК, кодирующая необходимый белок, провести с помощью обратной транскриптазы синтез комплементарной ДНК (сокращенно кДНК) и перевести ее в двунитевую структуру с помощью Д П<-полимеразы. Можно, наконец, вырезать желаемый ген непосредственно из ДНК того объекта, бело которого собираются продуцировать. Два последних подхода не дают сразу же индивидуального гена и требуют предварительного отбора из сложной смеси кДИК или фрагментов хромосомной ДНК. Эта проблема решается уяЛ на уровне илстои микроорганизмов, в которые введены новые наследственные программы, и пути ее решения будут изложены несколько ниже. [c.301]

Нуклеотидные последовательности З -концов значащих цепей ДНК, кодирующих разные мРНК млекопитающих и вирусов зукариот. Подчеркнуты инвариантные олигонуклеотиды ААТААА и GT-богатые участки. Стрелками указаны сайты полиаденилирования. HLA-один из генов, кодирующих главный антиген гистосовместимости a-IFN и ylFN - а- и у-интерфероны соответственно Adi 2 El А и Ad2 L2-трансформирующий белок Е1А [c.44]

Гены, кодирующие белки, как правило, содержат кодирующие области (экзоны), прерываемые одним или более интронами. Однако некоторые гены (например, гистоновые или кодирующие интерфероны) не имеют вставочных последовательностей. Число таких последовательностей сильно варьирует от гена к гену, а количество ДНК, приходящееся на долю интронов, во много раз превышает количество ДНК кодирующих областей (табл. 111.2)-у некоторых организмов в десятки раз. Как правило, нуклеотидные последовательности аналогичных экзонов, относящихся к паралогичным генам в данном геноме или к ортологичным генам в геноме разных видов, более консервативны, чем нуклеотидные последовательности соответствующих интронов. Положение интронов, как правило, фиксировано, а по длине и составу они варьируют. [c.170]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология