Сортировка X и Y хромосом

Рис. 2.89. Контурный график (интенсивность флуоресценции) двумерной лазерной сортировки хромосом из гибридных клеток китайский хомячок X человек , в которых осталась только человеческая У-хромосома. Буквы А-К относятся к разным хромосомам хомячка буква Ь указывает на У-хромосому человека. А. Все хромосомы Б. Только маленькие хромосомы. (По [330].)

Узким местом, ограничивающим применение проточных цитометров для наработки метафазных хромосом в препаративном количестве, достаточном для их использования в молекулярно-генетических исследованиях, является скорость сортировки, а следовательно, и время, которое необходимо затратить для реализации соответствующих проектов. В табл. 2 приведены количества метафазных хромосом, которые требуются для проведения ряда генно-инженерных экспериментов. При использовании обычных сортировщиков, которые анализируют ДО 1000 частиц/сек, индивидуальные хромосомы человека можно накапливать лишь со скоростью 40 хромосом/сек (1000/23). Ясно, что в этом случае 10 хромосом теоретически могут быть получены только за семь часов непрерывной работы прибора, а следовательно, для наработки 6,4 х 10 хромосом, требуемых [c.47]

Препарат хромосом человека, не содержащий примеси клеток, может быть получен при соответствующей обработке, вскрывающей плазматическую и ядерную мембраны клетки. В семидесятых годах были разработаны методы фракционирования и проточной микрофлуоримет-рии, позволяющие осуществлять сортировку хромосом на фракции, содержащие индивидуальные хромосомы человека высокой чистоты (рис. 18.13). Когда свободные хромосомы добавляют к культивируемым клеткам мыши, то эти клетки могут захватывать целые хромосомы в процессе эндоцитоза. Внутри реципиентной клетки захваченные хромосомы обычно деградируют, распадаясь на фрагменты. Если такие фрагменты содержат центромерные области, то они могут поддерживаться как единое целое. Фрагменты, лишенные центромеры, могут транслоцироваться на мышиные хромосомы. В том и другом случае определенные человеческие гены будут экспрессироваться в гибридных клетках (рис. 18.14). Встраивание фрагментов в хромосому мыши происходит с очень низкими частотами, от 10 " до 10 на клетку. Встраиваемые фрагменты могут быть как очень мелкими, не видимыми в световой микроскоп, так и достаточно крупными, включая плечи хромосом и даже целые хромосомы. Такой перенос генетического материала от донора, сопровождающийся встраиванием в хромосомы реципиента, называется трансформацией (как у бактерий) или трансфекцией. [c.304]

Рис. 2.88. Принцип сортировки хромосом с помощью лазера. Хромосомы окрашены флуоресцирующим красителем. Флуоресценция возбуждается лазерным лучом и измеряется для каждой хромосомы отдельно. Данные измерений используют для сортировки хромосом. ( ourtesy of Dr. . Gremer.)

Сортировка X- и Т-хромосом. В работе [333, 330] осуществлена препаративная проточная цитофотометрия X- и У-хромосом человека. Х-хромосома была выделена из клеточной линии с кариотипом 48,ХХХХ с помощью однолучевой сортировки. Этот материал был использован для приготовления библиотеки хромосомной ДНК после обработки рестриктазой ЕсоК1 и клонирования в фаге (см. разд. 2.3,2,2), У-хромосома отобрана с помощью двулучевого сортера из материала гибридной клеточной линии китайский хомячок X человек . Получение клеточных гибридов будет описано в разд, 3,4,3 в связи с локализацией генов в хромосомах. Важная особенность гибридных клеток человек х мышь или [c.132]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология