ДСН—ПААГ фотографирование геля

Операции окрашивания и отмывки гелей агарозы отличаются некоторым своеобразием, связанным с тем, что для их ускорения пластину агарозы целесообразно предварительно сжатьн высушить. Процедуру начинают с осаждения белков и вымывания амфолитов, для чего пластину помещают на 5 мин в водный раствор, содержащий 10,5% ТХУ и 3,5% сульфосалициловой кислоты. Уменьшение продолжительности этой обработки по сравнению с пластинами ПААГ оправдано значительно большей пористостью 1%-ного геля агарозы. Затем пластину промывают двумя сменами 96%-ного этанола (по 10 мин в каждой) и покрывают смоченным в этаноле листком фильтровальной бумаги. На него кладут еще 4—5 листков сухой фильтровальной бумаги, накрывают стеклянной пластинкой и прижимают ее грузом примерно в 1 кг. За 20 мин пластина геля заметно сжимается. Сняв груз и бумагу, гель агарозы подсушивают феном до состояния тонкой пленки. Эту пленку окрашивают в течение Ш мин 0,11%-ным раствором СВВ R-250 в смеси, содержащей 8% уксусной кислоты и 25% этанола, без подогрева, затем отмывают в трех сменах того же растворителя (по 10 мин) и снова высушивают. Закрепленная на прочной и гибкой пластмассовой подложке тонкая пленка окрашенного геля агарозы удобна для хранения и фотографирования. Из нее можно вырезать представляющие интерес треки сфокусированных белков. Если при ИЭФ использовали гель агарозы без подложки, то ее можно ввести при Высушивании, уложив на нее гель перед началом [c.44]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология