Концентрирование пикорнавирусов

Концентрирование пикорнавирусов с помощью ультрацентрифугирования [c.59]

Выбранную культуру клеток можно выращивать на поверхности культурального флакона в стационарных условиях или в роллерной установке (в последнем случае используют бутылки и пробирки), а также в суспензии при осторожном перемешивании. Клетки наращивают до монослоя или высевают с нужной плотностью из трипсинизированной культуры за сутки до использования (хотя следует помнить о чувствительности рецепторов пикорнавирусов к протеазам [12]). В нашей лаборатории оказалось наиболее удобным использовать для получения небольших количеств (до 100 мкг) полиовируса вращающиеся пробирки, поскольку в них значительное количество клеток (Ю клеток на площади 66 см ) покрывается небольшим объемом среды (1 мл), что обеспечивает экономный расход радиоактивных соединений и позволяет получить препарат вируса, не требующий концентрирования перед очисткой. Культивирование полиовируса в роллерных установках обычно дает такой же выход и удельную радиоактивность, как и выращивание в монослое на флаконах при одинаковых концентрациях клеток, вируса и радиоактивного предшественника. Риновирусы, однако, предпочтительнее выращивать в роллерных культурах, поскольку для их репродукции нужны хорошая аэрация и слабокислый pH, хотя сами вирионы в кислой среде лабильны. [c.48]

Препараты пикорнавирусов, полученные из культур тканей, контаминированы клеточными компонентами, в том числе мембранами, и если вирус предполагается использовать для антигенного или биохимического анализа, его необходимо очистить. При этом, как правило, используют тот или иной метод центрифугирования в градиенте плотности. Если работа ведется со значительными количествами вируса, очистке обычно предшествует концентрирование, например осаждение вируса сульфатом [c.57]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология