Определение нуклеотидного состава РНК методом электрофореза на бумаге

Для олигонуклеотидов иэ панкреатического РНК-азного гидролизата концентрацию фермента можно снизить до 0,1 мг/мл и проводить инкубацию 30 мин при 37°С. По окончании инкубации раствор иэ капиллярной трубки наносят непосредственно на полоску DEAE-бумаги шириной 2,5 см и длиной 30 см. По одну сторону от гидролизата наносят образец негидролизованного олигонуклеотида, по друг>то -смесь розового и голубого маркеров. Полоску бумаги кладут на рамку или помещают в прибор для электрофореза и затем смачивают смесью 2,5%-ной муравьиной кислоты и 8,7%-ной уксусной кислоты. Этой же смесью заполняют резервуары. Электрофорез проводят при напряжении 30В/см до тех пор, пока голубой маркер не продвинется приблизительно на /д общего расстояния. Ток отключают, бумагу осторожно вынимают и дают ей высохнуть. Положения красителей-маркеров отмечают радиоактивными чернилами и проводят радиоаутографию электрофореграммы. Измеряют расстояния пятен от старта и идентифицируют последовательность в соответствии с данными, приведенными в табл. 11.1. В сомнительном случае пятна можно элюировать и щелочным гидролизом определить нуклеотидный состав. Это подобно методу определения последовательности с использованием [c.281]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология