Очистка мышиного IgM из асцитной жидкости

А. Очистка мышиного IgM из асцитной жидкости [c.322]

Во-первых, в зависимости от области применения существует возможность выбора наиболее подходящего и удобного источника получения моноклональных антител культуральной или асцитной жидкости. При использовании препаратов асцитной жидкости возникают определенные трудности при интерпретации полученных результатов, обусловленные примесью естественных мышиных антител к моноклональным антителам (высокие фоновые уровни). Однако в 1 мл асцитной жидкости содержится несколько мг МКА. Поэтому, когда используют разведение 1 1000 или более, значительная часть посторонних мышиных антител удаляется разбавлением. Иногда необходимо полностью удалить из препарата примесь естественных иммуноглобулинов (например, при использовании моноклональных антител для выделения и очистки небольшого количества белкового антигена с целью биохимического анализа). В последнем случае предпочтительно выделять моноклональные антитела из культуральной жидкости. При использовании в иммунологических реакциях асцитной жидкости следует иметь в виду присутствие посторонних фоновых антител. В некоторых случаях в организме мыши может существовать высокий титр природных антител, реагирующих с антигеном, специфически распознаваемым моноклональными антителами. При использовании асцитной жидкости возникают и проблемы неспецифического характера. Например, культуральная жидкость дает более ясное и точное окрашивание образца в иммуногистологических исследованиях. [c.148]

На колонках для ГА-ВЖХ связываются все моноклональные IgG мыши и крысы (Henson, 1985). Профиль элюции моноклонального IgG2b из асцитной жидкости мышей приведен на рис. 7-5. Мышиные и крысиные моноклональные IgG элюируются с колонки ГА-ВЖХ при концентрациях фосфатов от 60 до 200 мМ. Очистка в одну стадию достижима для моноклональных антител, которые элюируются при высоких концентрациях фосфатного буфера. Некоторые моноклональные антитела элюируются при низких концентрациях фосфата и плохо отделяются от основной массы сывороточных белков. Предварительное осаждение глобулинов сульфатом аммония дает возможность получать с помощью ГА-ВЖХ очищенные препараты многих, но не всех типов моноклональных антител. Тем не менее из собранных иммуноглобулиновых фракций трудноочищае-мых антител после диализа и рехроматографии удается получать достаточно чистые препараты, хотя и с некоторыми потерями. [c.145]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология