Моноклональные антитела использование в иммуноаффинной хроматографии

Многие интерфероны были в последнее время успешно очищены. Наиболее эффективные этапы очистки включают хроматографию на голубой сефарозе и веществах, хелатирующих Си и Zn [21, 127], адсорбционную хроматографию на пористом стекле [116, 267, 279] и иммуноаффинную хроматографию с использованием как поликлональных, так и моноклональных антител [30, 170]. Процедуры очистки с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН позволяют одновременно получать интерфероны разных классов [99]. [c.54]

Гомогенность и специфичность центров связывания моноклональных антител делают их особенно удобными для использования в иммуноаффинной хроматографии. В табл. 6.15 мы приводим высокоэффективный метод получения иммуносорбентов для колонок и их применения, а также различные варианты условий элюции, которые позволили нам очень эффективно с сохранением их биохимической активности очистить макромолекулы, обладающие высокой чувствительностью к воздействию оазличпых агентов и находящиеся в низкой концентрации. [c.196]

В зависимости от области применения антител и от их свойств можно использовать самые различные способы очистки. Для диагностических целей часто достаточно имет препараты антител 70-95%-ной степени чистоты. С другой стороны, при применении антител in vivo их чистота должна быть намного выше. В сывороточных средах содержание антител не превышает 10% от общего количества белка. Хотя проведение процесса на бессывороточных средах и облегчает очистку, на практике относительно легко достичь 90%-ной и даже более высокой степени чистоты независимо от содержания сывороточных белков. При очистке антител для их использования ш vivo на последних стадиях очистки приходится решать одни и те же проблемы независимо от природ и питательной среды. Высокоэффективные методы очистки необходимы для удаления следовых количеств не только примесных белков, но и пирогенов и ДНК. Ранее для очистки антител широко применяли фракционирование сульфатом аммония с послед)пющей ионообменной хроматографией. Применение этих методов осложняется тем, что различные моноклональные антитела имеют разные изо-электрические точки [34, 36 J. Кроме того, после ионообменной хроматографии чистота антител не превышает 90%, поэтому для дальнейшей очистки необходимы другие методы, например гель-фильтрация. Однако в тех случаях, когда моноклональные антитела использ)пют для диагностики или иммуноаффинной очистки, ионообменная хроматография или ее сочетание с предварительным осаждением позволяют получить препараты достаточного качества. [c.47]