Моноклональные антитела мАт анализ типов

Отбор моноклональных антител, связывающихся с различными эпитопами на антигене. Для высокоспецифического выявления ряда антигенов наиболее удобной является сэндвич -модификация твердофазного иммуноферментного анализа. Использование в таком типе анализа двух моноклональных антител, взаимодействующих с разными эпитопами, позволяет сократить время анализа. Кроме того, такие пары моноклональных антител в ряде случаев обладают большей авидностью по сравнению с аффинностью каждого отдельного антитела. Для выявления антител, связывающихся с различными центрами на антигене, обычно используют три метода. [c.173]

Гибридомная технология интенсивно развивается. По-видимому, менее чем через десять лет будет получено около 10 различных типов моноклональных антител различной специфичности, синтезированных гибридомами, полученными при слиянии клеток крыс и мышей. Большинство из этих гибридом будет рассредоточено во всем мире по отдельным лабораториям. Очевидно, в пределах различных центров некоторые виды гибридом будут многократно дублироваться. Это создает проблему иного плана, чем просто явное повторение. Важным свойством моноклональных антител является то, что они могут быть получены в количествах, достаточных для снабжения ими большого числа лабораторий, занимающихся сходными или дополняющими данную тему анализами. Результаты этих исследований можно сопоставить и сравнить. Однако часто различ- [c.150]

Наиболее простым и чувствительным способом выявления антител, способных одновременно связываться с антигеном, является тест на аддитивность связывания. Предварительная очистка и введение метки в моноклональные тела в этом случае не нужны. В основе метода лежит оцеНка числа антигенных центров, одновременно доступных для пары антител. Определение осуществляется методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. Основным условием при этом является полное насыщение антигена обоими типами антител. Поэтому на первой стадии Эксперимента необходимо получить кривые насыщения антигена аСцитиой или культуральной жидкостью, содержащей анализируемые антитела, и затем определить максимальную оптическую плотность в иммуноферментном тесте, достигаемую при насыщении. [c.174]

Примером современного метода использования моноклональных антител для гистопатологической диагностики заболеваний человека может быть анализ биоптатов (образцов ткани) лимфатических узлов как способ определения типа опухолей лимфатической системы (например, болезни Ходжкина, различных лимфом и др.). [c.331]

Три типа методов ВЖХ, описанные в этой главе, дают возможность очищать и анализировать иммуноглобулины быстрее и с большей чувствительностью, чем обычные методы колоночной хроматографии. В настоящее время емкость колонок для ВЖХ не так велика, как емкость колонок для обычной хроматографии, но уже начато производство препаративных колонок. для ВЖХ. Доступны также колонки для ионообменной ВЖХ, использование которых здесь не обсуждалось. Методы получения высокоочищенных препаратов моноклональных антител и их анализа становятся очень важными не только потому, что эти препараты представляют интерес для биохимиков при исследовании регуляции иммунного ответа и связывания с антигенами, но и потому, что они все шире применяются в медицине для диагностики и лечения. Методы ВЖХ обеспечивают необходимую для решения этих задач разрешающую способность и высокую скорость проведения разделений. [c.148]

Хотя, как указывалось выше, клеточные культуры и находили применение в иммунологии, в течение ряда лет использование этой системы осложнялось следующим обстоятельством. Клетки, синтезирующие интересующие исследователей антитела (например, клетки селезенки животных, иммунизированных специфическими антигенами), плохо росли в культуре или совсем не росли, а клетки миеломы продуцировали антитела с неизвестной специфичностью (разд. 15.4). Способность этих двух типов клеток к слиянию позволила в последнее время наладить крупномасштабное производство моноклональных антител (Kohler, Milstein, 1975). Если мышь иммунизировать неочищенным препаратом антигена и затем клетки ее селезенки гибридизовать с клетками миеломы, то среди полученных гибридных клеток найдется по крайней мере одна, продуцирующая антитела, специфические к исходному антигену. Эта клетка может быть клонирована (разд. 8.1) и трансплантирована в мышь в форме опухоли, продуцирующей высокоспецифические антитела в количестве, измеряемом граммами. Представляя безусловный интерес для иммунологов, это, кроме того, дает возможность биохимику получать антитела к материалу, который он не может должным образом очистить. Такие антитела могут быть, в частности, использованы для генетического анализа антигенов поверхности клеток человека (Barnstable et al., 1978). [c.12]

Получен набор моноклональных антител против белка ст1 реовируса типа 3 [48, 118, 159 . Некоторые из них обладали нейтрализующей способностью, но не подавляли гемагглютинацию. Другие, напротив, тормозили гемагглютинацию, но не нейтрализовали вирус [48]. В этих исследованиях убедительно показано, что а1 имеет три разных функциональных эпитопа. Используя конкурентный радиоиммунный анализ, установили, что эти эпитопы связаны с разными структурными областями белка с1 [294] (рис. 20.8). Нейтрализующий эпитоп узнается моноклональными антителами А2 и 05 гемагглютинирующий — антителами С1, В6 и Р4. Третий эпитоп, функционально отличающийся от этих двух, узнается антителом В2. [c.305]

Для одного из вариантов, селекционированных с моноклональным антителом (S 10/1), было обнаружено изменение последова-тельностп в положении 368 лизин был заменен глутаминовой кислотой (то же изменение произошло и в полевых штаммах 1972 г.). Головки NA этого варианта образуют изоморфные кристаллы по сравнению с кристаллами NA дикого типа (А/Токуо/3/67). Результаты дифракционного анализа с использованием у Лучей для кристаллов варианта были собраны и проанализированы Р. ol- [c.145]

Гистологический анализ опухолей человека в больщинстве случаев показывает, что они инфильтрированы клетками зоны воспаления (рис. 20.8). В инфильтрате обычно доминируют лимфоциты и макрофаги, но могут присутствовать и клетки других типов, в том числе дендритные клетки, фанулоциты и тучные клетки. Более точный анализ типов составляющих опухоли клеток с применением моноклональных антител (мАт), позволяющий выявлять субпопуляции лимфоидных клеток (рис. 20.9). показывает, что в опухолях может присутствовать больщинство основных субпопуляций лимфоцитов. [c.382]

Однако чувствительность одностадийной схемы ниже чем двухстадийной, а контакт фермента с анализируемой средой может неблагоприятно отражаться на результатах анализа. Данная схема налагает также дополнительные требования на соотношение концентраций меченых и иммобилизованных антител с целью исключения их конкуренции за связывание с ограниченным числом антигенных детерминант на молекуле антигена. В этой связи целесообразным является использование в-анализе моноклональных антител, специфичных к различным антигенным детерминантам на мдлекуле антигена. Следует подчеркнуть, что данный метод анализа не может быть отнесен к конкурентному типу, так как формирование комплекса антигена с мечеными иди иммобилизованными антителами не [c.88]

Поликлональная антисыворотка может содержать до 10 ООО различных типов молекул IgG. Напротив, все молекулы моноклональных антител должны быть идентичными. Моноклональные антитела предпочтительнее в методах конкурентного иммуноанализа, поскольку в этом случае можно утверждать, что меченый или связанный с твердой фазой антиген и определяемое вещество конкурируют за один и тот же центр связывания. Моноклональные антитела очень хорошо работают в сандвич -анализе, поскольку, как правило, хорошо известна специфичность их эпитопов. Такие антитела легко получать в больших количествах и с высокой степенью чистоты. Большинство нативных антител бивалентны, и все они моноспецифичны. Недавно с помощью гибридных гибридсяк и методов генной инженерии получены новые типы антител. Антитела MOiyT быть мечены или связанными с твердой фазой с помощью пассивной адсорбции или за счет ковалентных связей. [c.10]

Для обеспечения специфичности в анализе используют два типа моноклональных антител, один из которых специфичен к бе-та-субьединице, а второй - к альфа-субьединице гормона. Если для связывания применяют моноклональные антитела к альфа-субьединице, то на мембране кроме h G также будут специфически сорбироваться другие гормоны (FSH, hLH, TSH), аль -субь-единицы которых дают перекрестную реакцию с алы -субьедини-цей h G. В этом случае специфичность определения h G не изменится, однако благодаря хук -эффекту (особенно если в пробе содержится много h G) может оказаться заниженной (рис. 6.2). Это [c.82]

На практике при выполнении цитофлуориметрического анализа ставить для каждого из используемых реагентов все необходимые контроли затруднительно. Часто возникающие сомнения разрешаются в результате тщательной проверки специфичности соответствующего рабочего реагента. В случае моноклональных антител можно ограничиться проверкой чистоты препарата антител. При использовании гетерологичных антисывороток следует убедиться в том, что они не реагируют с клетками (или клеточными линиями) других типов, которые не содержат соответствующих лигандов (антигенов). После того как продемонстрирована высокая специфичность реагента, можно использовать достаточно простые контроли. В прямом методе адекватным негативным контролем могут служить неокрашенные клетки. Эквивалентным такому контролю вариантом в непрямом методе является обработка клеток только вторым (меченным флуорохромом) реагентом. [c.352]

Желательно предварительно проверять имеющиеся препараты моноклональных антител на их пригодность для обнаружения антигенов на блоте. Для этого можно использовать специальный прибор для микротитрования с системой прокачивания растворов (типа прибора Bio Dot фирмы Bio Rad). Искомый антиген как нативный, так и денатурированный наносят на нитроцеллюлозные фильтры в виде небольших пятен (так называемый дот-анализ). Обрабатывая такие фильтры различными препаратами моноклональных антител, можно отобрать такие препараты, которые взаимодействуют с денатурированным антигеном и, следовательно, пригодны для проявления соответствующих блотов. Моноклональные антитела, не реагирующие с денатурированным антигеном, отбрасывают или подвергают дополнительной проверке, варьируя условия связывания и отмывки. [c.354]

Использование меченых моноклональных антител для проведения ферментативного иммунометрического анализа связано с преимуществами двух типов. В первую очередь мы обсудим преимущества, которые представляют методы, основанные на работе в условиях избытка любых антител, затем — преимущества, которые в связи с этим дают возможность применения в качестве избыточного реагента моноклональных антител. [c.386]

Теперь обратимся к условиям проведения иммунометрического анализа. Использование избытка реагентов позволяет работать в условиях протекания реакции первого порядка. Благодаря этому между измеряемым сигналом и концентрацией тестируемого компонента существует линейная зависимость при условии химической однородности используемых реагентов. Что же касается поликлональных антител, то присущая им химическая гетерогенность, связанная с присутствием в популяции молекул с различной аффинностью, ограничивает возможности их использования для линейного иммунометрического анализа. Препараты моноклональных антител, напротив, с химической Точки зрения представляют собой идеальный тип реагента, поскольку могут быть использованы в большом избытке и содержат молекулы с абсолютно одинаковой реакционной способностью. [c.389]

При двухцентровом иммунометрическом анализе моноклональные антитела обладают еще одним преимуществом по сравнению с обычными поликлональными антителами. Они придают ему большую специфичность, или избирательность. Обнаружение молекул данного типа основано на взаимодействии антител с их уникальными антигенными детерминантами. Специфичность [c.392]

Рис. 20.8. Взаимное расположение антигенных доменов в молекуле гемагглкь тинина реовируса типа 3 (из работы [294] с разрешения авторов). Моноклональные антитела, связывающиеся с определенными доменами, отмечены кружками, заполненными точками, а антитела, связывающиеся с эпитопами, которые перекрывают эти домены, — светлыми кружками. Пунктирная линия вокруг антитела 03 означает, что данные радиоиммунологического анализа не позволяют точно определить его локализацию.

Особый интерес представляет развитие ГМК у человека. Рассмотрим гистогенез гладкой мышечной ткани сосудов и миометрия, а также сопоставим этот процесс с изменениями лейомиоцитов матки во время беременности, родов и в послеродовом периоде. Анализ экспрессии цитоскелетных и сократительных белков выявил гетерогенность ГМК в сосудах на всех этапах эмбриогенеза человека [Нанаев А.К., 1997]. У эмбрионов в ГМК аорты экспрессируется как мышечный (5М), так и немышечный (NM) типы миозина. В самой незрелой популяции лейомиоцитов преобладают КМ-изоформы, выявляемые моноклональными антителами ЫМ-Р6. Эти данные свидетельствуют, что миозин может быть использован как маркер различных стадий дифференцировки ГМК и характеризовать динамику изменений популяции ГМК сосудов в различных возрастных периодах, а также в условиях патологии. [c.124]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология