Наращивание и очистка ротавирусов для биохимических исследований

Наращивание и очистка ротавирусов для биохимических исследований [c.211]

Чтобы избежать размножения смесей вирусов, коадапти-рующихся к росту в культуре, при первой возможности следует провести три цикла размножения вируса из одного инфекционного вириона. Оптимальный способ проведения таких циклов состоит в очистке вируса из индивидуальных бляшек однако некоторые изоляты, хотя и размножаются в клетках МА 104, но не образуют бляшек. В этих случаях очистку вируса проводят методом предельного разведения. Для этого готовят последовательные разведения первого пассажа вируса, дающего выраженное ЦПД, и заражают монослойные культуры клеток МА 104, выращенные в планшетах с 24 или 48 лунками. После 1 ч адсорбции при 37 °С инокулят удаляют, в лунки вносят среду МЕМ с 0,5 мкг/мл трипсина и инкубируют культуру 48—72 ч при 37°С. Собирают урожай из нескольких индивидуальных лунок, зараженных вирусом в том разведении, которое дает ЦПД лишь в небольшой части лунок (5—10%). Вирус из этих лунок разводят и опять высевают на культуру клеток, как описано выше. Данную процедуру следует повторить по крайней мере три раза, прежде чем наращивать вирус для биохимических исследований. Если изолят ротавируса дает бляшки на клетках МА 104, следует провести три цикла размножения из индивидуальных бляшек, что является лучшим методом очистки вируса перед наращиванием для дальнейшей работы. [c.210]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология