Монослойная культура

Итак, суспензионные культуры представляются предпочтительными с точки зрения увеличения выхода клеток. Монослойные культуры, однако, также обладают рядом преимуш,еств. [c.75]

Эти системы обеспечивают истинные гомеостатические условия без изменений концентрации питательных веществ и метаболитов, а также числа клеток. Гомеостаз обусловлен постоянным вхождением среды в культуру и одновременным удалением равного объема среды с клетками. Поэтому такие системы пригодны только для суспензионных культур и монослойных культур на микроносителях. Подробнее о культурах с постоянным протоком будет сказано в разд. 4.6. [c.73]

Это обычный тип культур, в котором клетки вводят в фиксированный объем среды. По мере роста клеток происходит использование питательных веществ и накопление метаболитов. Среда, следовательно, должна постоянно сменяться, что в свою очередь приводит к изменению клеточного метаболизма, часто называемому физиологической дифференцировкой. Со временем пролиферация клеток прекращается вследствие истощения питательных веществ, накопления токсичных продуктов отходов и зависящего от плотности ограничения роста в монослойных культурах. Известны методы увеличения продолжительности жизни непроточных культур и, следовательно, увеличения выхода клеток путем различных способов подкормки субстратами. [c.72]

Эффективность смены среды в монослойных культурах такова, что позволяет достигать полного удаления нежелательных компонентов. [c.76]

В монослойных культурах нечасто удается получить экспоненциальный рост за период более чем нескольких суток. Посев клеток при сниженной плотности ведет обычно к увеличению продолжительности лаг-фазы, в течение которой происходит несколько делений с увеличенным временем генерации, и все, чего при этом добиваются, сводится к восьмикратному увеличению числа клеток (т. е. трем клеточным делениям) в экспоненциальной фазе роста. Однако, как уже указывалось (Риск, [c.58]

Следует отметить, что система с микроносителями обладает преимуществами г), д) и отчасти б) по сравнению с суспензионной культурой. У монослойной культуры по сравнению с суспензионной можно отметить четыре главных недостатка. [c.76]

Во всех случаях использование микроносителей исправляет эти недостатки монослойной культуры. [c.76]

Таблица 3.4. Сравнение объемов среды и общих объемов для разных систем монослойных культур

И теряется при каждом пересеве). Статические суспензионные культуры клеток непригодны для увеличения масштабов культивирования по причинам, уже названным при рассмотрении монослойных культур. [c.97]

П1. При необходимости проведения дополнительных исследований или для анализа при большем увеличении приготовьте культуры на покровных стеклах. Покровные стекла с полученными монослойными культурами следует фиксировать и окрашивать с помощью стандартных гистологических методов, а морфологию исследуемых клеток следует сравнивать с соответствующими контролями. [c.134]

Выявление кератина в клетках монослойной культуры на покровном стекле или в клетках, осажденных центрифугированием на предметное стекло, проводится следующим образом. [c.151]

Метод культуры ткани наиболее перспективен в изучении необходимой продолжительности воздействия лекарства и восстановления клеток и в разработке методов количественной оценки действия лекарств. Монослойная культура требует наименьшего количества клеток и незаменима, следовательно, при создании микрометодов, обеспечивающих множественный скрининг лекарств в широком диапазоне концентраций. Кроме того, использование этого метода облегчает автоматизацию испытаний. Если количество клеток на самом деле слишком мало, то часто бывает возможным культивировать клетки до тех пор, пока не получится достаточное для анализа количество, несмотря на то, что данные об изменении чувствительности клеток к препаратам в ходе культивирования оказываются противоречивыми. Как правило, два — три пассажа клеток не влияют па чувствительность, и такое пассирование даже рекомендуется, поскольку приводит к снижению вариабельности результатов между параллельными культурами [18]. Если примесь клеток стромы очень высока, то пассирование клеток часто представляет возможность очистить опухолевые клетки путем дифференциальной ферментативной обработки или физического отбора клеток (см. гл. 5 и 6). [c.262]

Монослойная культура может быть перенесена во второй культуральный сосуд после диссоциации клеток монослоя трипсином и разведения. В случае субкультивирования суспензионных культур достаточно только разведения. Диссоциация клеток монослойной культуры достигается лучше всего промыванием монослоя фосфатным солевым буфером (ФСБ) или ФСБ с 1мМ этилендиаминтетраацетатом (ЭДТА) и последующей инкубацией с холодным раствором трипсина (0,25%-ный неоч11-щенный или 0,01—0,05%-ный очищенный) в течение 30 с. После этого трипсин удаляется, клетки инкубируют дополнительно в течение 15 мин. Затем клетки суспендируют в среде, определяют их количество и рассевают на новые флаконы. [c.23]

МОНОСЛОЙНЫЕ КУЛЬТУРЫ КРОВЕТВОРНОЙ ТКАНИ [c.21]

Монослойные культуры костного мозга проходят три последовательные фазы развития, каждая из которых имеет свою морфологическую характеристику (рис. 5 и 6). Эти фазы детально описаны для монослойных культур кле- [c.22]

Имеются такие штаммы животных клеток, которые могут расти и в прикрепленном состоянии, и в виде суспензии. Прикрепившиеся клетки размножаются, растут и развиваются до тех пор, пока не сольются в монослой, то есть плотность клеток выступает тормозным сигналом. Однако при смене питательной среды на новые порции наблюдается дальнейшее разрастание клеток в форме нескольких слившю ся слоев. Подобного результата можно добиться при использовании других факторов воздействия на клеточные культуры (гормоны, ферменты, pH и т. д.). Тем не менее, на практике широко пользуются монослойными культурами. [c.535]

Посевной материал (инокулят, от лат. ino ulatio — прививание) заметно сказывается на скорости роста клеток в монослойной культуре. В случае применения первичных клеток необходимо иметь их в более высокой плотности на 1 см внутренней (рабочей) поверхности культиватора. [c.539]

Интерферон Р получают из фибробластов, выращенных в монослойной культуре, индуцированной полиИ полиЦ в присутствии циклогексимида и актиномицина Д. Обычно интерфероны продзщируются в малых количествах (около 1 мг на 10 л тканевой культуральной жидкости) и, к тому же, после 48—72 часов клет-ки-продзщенты отмирают. Вот почему производство лейкоцитарных интерферонов относят к разряду дорогостоящих и экономически — мало выгодных. Поэтому успешно завершившиеся работы [c.559]

Актин входит в состав многих клеточных структур и может связываться с целым рядом специфических белков. Жесткие пучки параллельно расположенных актиновых филаментов, скрепленных белковыми сшивками (например, фимбриновыми), имеются в микроворсинках и стереоцилиях, где они выполняют главным образом структурную роль. Пучки актиновых нитей, связанные с короткими биполярными агрегатами молекул немышечного. миозина, встречаются в определенных участках клетки, где нужна сократительная активность, например в сократимом кольце делящейся клетки, в опоясывающих десмосомах у апикальной поверхности эпителиальных клеток, а также в напряженных нитях, характерных для клеток, растущих в монослойной культуре. Менее упорядоченные системы актиновых филаментов содержатся во всей цитоплазме и могут придавать ей свойства геля. Густая сеть таких филаментов образует непосредственно под плазматической мембраной так называемый кортикальный слой. Эта сеть формируется с помощью гибких сшивающих белков, таких как филамин она способна обратимо изменять свои механические свойства в зависи.ности от концентрации ионов Са , что сопровождается повышением или понижение.ы вязкости цитоплазмы эти изменения происходят при участии актин-фрагментирующих белков, таких как гельзолин. Предполагается, что актиновые сети, прикрепленные с помощью специальных белков к плазматической мембране, взаимодействуют с немышечным миозином, обеспечивая подвижность клеточной поверхности, и играют ключевую роль в сложном процессе передвижения всей клетки. [c.120]

В целом в настоящее время невозможно установить общие принципы составления универсальной бессывороточной среды. Во многих случаях метод проб и ошибок является единственным методом подбора ингредиентов для оптимальной среды. Как уже говорилось, оптимальной исходной средой для монослойной культуры является смесь DME и F12 в соотношении 1 1с добавлением инсулина (5 мкг/мл), трансферрина (5 мкг/мл), селенита (30 нМ), ФРЭ (25 нг/мл), альбумина (1 мг/мл). Систематическое удаление одного из компонентов может помочь идентифицировать незаменимый фактор или факторы. Предложенный Хэмом [7] метод составления среды по лимитирующему фактору может в ряде случаев привести к выбору оптимальной концентрации незаменимого компонента. Однако этот лобовой подход требует много времени и перебора большого количества вариантов. [c.47]

При пересеве клеток в новые сосуды рост клеток с максимальной скоростью возобновляется не сразу, особенно при низкой плотности посева клеток. В течение 1—2 дней после посева клетки находятся в лаг-фазе, в течение которой они адаптируются к новым окружающим условиям и кондиционируют новую среду. Как было показано (Риск, 1972), это не является обязательным свойством растущих клеток. Лаг-фаза может быть практически элиминирована, если избегать избыточной трипсинизации клеток и поддерживать клетки при пересеве при 37 С. Большинство мышиных клеток L929 начинают делиться в течение суток после пересева более концентрированного инокулята. Тем не менее в течение первых суток после посева часто наблюдается слабое увеличение количества клеток только через двое суток количество клеток удваивается. После этого экспоненциальный рост может поддерживаться в течение последующих 2—10 суток, если ростовая поверхность сосуда достаточно велика и регулярно производится смена среды. В дальнейшем, однако, скорость роста падает и количество клеток достигает насыщения (рис. 5.2). Некоторые клетки на этой стадии могут сохранять жизнеспособность в течение нескольких недель, особенно при смене среды каждые 5 дней. В других линиях клеток, растущих в так наз ываемой монослойной культуре, клетки начинают наползать друг на друга, нижележащие клетки оказываются в условиях недостатка питания и вскоре [c.57]

Первоначально уровень формирования ( С)-лактата из (11 — С)-глюкозы исследовался в клетках СЗН-10Т1/2, трансформированных метилхолантреном. Использование тонкослойной хроматографии для определения радиоактивности ( С)-лактата значительно повысило чувствительность измерения гликолиза (Тегсуак е1 а ., 1978). Этот быстрый, легко воспроизводимый метод представляет особую ценность, так как в монослойных культурах лишь ограниченное число клеток непостоянно продуцирует небольшое количество лактата. Как видно из результатов опыта, представленных на рис. 9, уровень гликолиза в клетках СЗН-10Т 1/2, трансформированных метилхолантреном (МХА), повышался линейно в течение первых [c.169]

Гр), чем плечо на кривой вьТживае-мости монослойной культуры (О < 2). [c.67]

Пропускание пузырьков газа через среду является чрезвычайно эффективным средством увеличения переноса кислорода (как было показано при ферментации у бактерий). Однако этот метод может быть опасен для клеток животных вследствие повреждающего действия пузырьков на клеточные мембраны из-за высокой поверхностной энергии. Повреждающее действие может быть снижено при использовании крупных пузырьков воздуха (которые характеризуются меньшей поверхностной энергией по сравнению с мелкими пузырьками) путем снижения скорости поступления воздуха (до 5 см /л/ч) и добавлением препарата плуроник Р-68. В разд. 4.7 описан специальный метод пробулькивания (ферментер с воздушным лифтом), который может быть с успехом использован в больших одноблочных монослойных культурах (например, во флаконах с большой площадью поверхности). При использовании пробулькивания эффективность оксигенирования повышается в культуральных сосудах с высоким отношением высоты к диаметру, поскольку высокое давление у дна таких сосудов увеличивает растворимость кислорода. [c.69]

Клетки, получаемые непосредственно из опухолей, можно клонировать на стекле в виде монослойной культуры. Однако в последнее время появляется все больше данных о клонировании клеток в суспензии, при котором удается избавиться от стро-мальных элементов, которым необходима для роста твердая подложка. Теоретически преимущество клонирования в суспензии состоит в том, что в такой системе эффектам подвержены лишь клетки с высокой способностью к самообновлению (возможно, стволовые клетки опухолей) клетки с низкой пролифе-ративнои активностью, составляющие большую часть опухоли, в формировании ответа не участвуют. Это, однако, справедливо только в том случае, когда колонии представляют собой истинные клоны (то есть возникают из единичной клетки, а не из клеточного агрегата) и подсчет их производится после многих клеточных генераций. В реальных исследованиях эти требова- [c.262]

Определение количества белка является относительно простым методом оценки числа клеток. Этот метод особенно удобен в монослойной культуре, и важное его преимущество заключается в том, что промытые препараты могут храниться долгое время в замороженном виде это не искажает конечный результат и облегчает скрининг. Завышенная оценка числа клеток может иметь место при изучении действия некоторых препаратов, подавляющих репликацию, но не влияющих на синтез белка (например, 5-бромдезоксиуридин и метотрексат). Для монослойной культуры была разработана специальная модификация метода Лоури, использующая феноловый реагент фолина [30]. Рекомендуется также метод с амидо-черным, при котором линейность стандартной кривой сохраняется в более широком диапазоне концентраций [3]. Вывод о цитотоксичности при использовании этого метода можно делать, если изменение накопления белка в культуре в течение времени показано в нескольких точках если же точка одна, то воздействие лекарственного препарата должно быть длительным и должен существовать период восстановления. [c.276]

Монослойные культуры. Клетки кроветворной и лимфоидной ткани, а также крови помещают в плоскодонные сосуды или в пробирки с покровными стеклами и культивируют в синтетической среде с добавлением сыворотки или без нее. Наблюдения проводят за прикрепившимися клетками, растущими по поверхности дна сосуда. В монослойных культурах могут быть, в частности, изучены пролиферация этих клеток, их движения, фагоцитарная активность и т. д. Как правило, в таких культурах в течение длительного времени (месяцы) наблюдается рост гистиоцитов н фнбробла-стов без поддержания кроветворения. [c.12]

В монослойных культурах можно не только следить за изменением морфологии клеток, но и проводить количественный анализ изменения состава эксплантированной клеточной популяции. [c.21]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология