Выделение мини-хромосом

В процессе выделения хромосом из клеток на стадии митоза эксперименты проводят при пониженных температурах (-Ь4°С), используя пластиковые пипетки во избежание деструкции хромосом Перед механическим разрушением клеток их суспендируют (10 клеток/мл) в гипотоническом растворе, а затем центрифугируют при 2500 д на холоду (примерно 25 мин при 4°С) Выход хромосом составляет около 10% от всех хромосом клеток-доноров Очищенные хромосомы должны быть использованы в опытах по переносу в реципиентные клетки (трансфекция) немедленно [c.185]

Отсюда, однако, не следует, что данная ДНК свободна от нуклеосом in vivo, поскольку вполне возможно, что при выделении мини-хромосомы была потеряна какая-то другая белковая структура. [c.391]

Основной эксперимент заключался в следующем. Выделенные мини-хромосомы вируса SV40 обрабатывали топо I, затем выделяли из контрольных и обработанных ферментом мини-хромосом ДНК и сравнивали их с помощью высокоразрешающего электрофореза в агарозном геле, при проведении которого происходит разрещение топоизомеров ДНК, т. е. две одинаковые ДНК, различающиеся всего на один супервиток, видны как две разные дискретные полосы. Оказалось, что ДНК, выделенные из обработанных топо I и контрольных мини-хромосом, содержат одинаковые наборы топоизомеров, обе негативно закручены и вообще неразличимы между собою. Следовательно, топо I не вносила изменений в ДНК, когда последняя была в составе мини-хромосомы. Отсюда вытекает, что ДНК в составе хроматина находится в равновесном, энергетически наиболее выгодном состоянии, и упругие торзионные напряжения в ней отсутствуют. [c.175]

ДНК вируса SV40 представляет собой кольцевую молекулу в 5200 п.п., контурная длина которой равна примерно 1500 нм. И в состоянии вириона, и будучи инъецированной в ядро, она упакована в серию нуклеосом. В этой форме ее называют мини-хромосомой. При обычном выделении контурная длина мини-хромосомы равна примерно 210 нм, а плотность ее упаковки составляет примерно 7. Изменение в концентрации соли может превратить ее в гибкую нитку бус со значительно более низкой плотностью упаковки. Из этого следует, что нуклеосомные нити in vitro в зависимости от условий могут находиться в более чем одной форме. [c.364]

Однако на мини-хромосомах SV40, которые транскрибируются РНК-полимеразой И, а не РНК-полимеразой I, как гены рибосомной РНК, были получены другие результаты (рис. 28). Транкскрипционно активные мини-хромо-сомы выявляются благодаря наличию на них растущих цепей РНК (обычно одной или двух). Такие миии-хромо-сомы составляют 1—2 % от всех мини-хромосом, выделенных из клетки. Они, однако, содержат то же самое число пузырьков, что и неактивные мини-хромосомы, причем их размеры одинаковы в обоих случаях. Наиболее интересным является то, что цепи РНК отходят как от линкеров, так и непосредственно от пузырьков, т. е. РНК-полимераза, очевидно, транскрибирует нуклеосомы. Эти данные свидетельствуют в пользу разворота нуклеосом и транскрипции их РНК-полимеразой. [c.153]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология