Амплификация последовательностей с неизвестной первичной структурой

Амплификация последовательностей с неизвестной первичной структурой [c.233]

Для амплификации последовательностей с использованием обычной ПЦР необходимо знание первичной структуры обеих последовательностей, фланкирующих анализируемый ампликон, что является существенным ограничением использования метода в анализе последовательностей неизвестной структуры. В исследовательской работе часто встречаются ситуации, когда известна последовательность, расположенная с одной стороны ампликона, а другую требуется определить, то есть совершить переход от известной последовательности генома к соседней неизвестной. Для решения этой задачи создано несколько методов, объединенных под общим названием односторонней ПЦР (single-sided P R). [c.233]

Теоретически наиболее просто проблема амплификации неизвестной последовательности решается в том случае, если она входит в состав рестрикционного фрагмента ДНК, длина которого допускает его использование для ПЦР, и к ней прилегает последовательность с известной первичной структурой (изображена пунктирной линией на рис. 26, а) [311]. К обоим концам фрагмента по открытым сайтам рестрикции с липкими концами присоединяют олигонуклеотидные адаптеры, иногда называемые шплинтами (splints), что позволяет в дальнейшем использовать последовательности адаптеров в качестве мест посадки праймеров при ПЦР. В удачно складывающихся обстоятельствах при использовании двух праймеров, комплементарных известному уча- [c.233]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология