Кальциевые компетентные клетки

Кальциевые компетентные клетки [c.83]

ДНК, используют для трансформации бактериальных клеток специальных штаммов Е. oli. Трансформация бактерий плазмидами векторов основана на способности клеток акцептировать внутрь себя молекулы ДНК (компетентности). Трансформацию клеток Е. oli обычно проводят одним из двух методов с помощью кальциевого шока или электропорацией. В обоих случаях бактериальная мембрана становится более проницаема для молекул ДНК, последние входят в протоплазму бактериальной клетки. [c.37]

Трансформацию клеток Е. соИ плазмидами можно вести любым из вышеперечисленных методов, но наиболее распространен благодаря своей простоте так называемый кальциевый метод Он основан на обнаруженном Манделем и Хига (Mandel, Higa, 1970) факте, что клетки, выдержанные на холоду, в присутствии хлористого кальция становятся компетентными для их трансформации [c.202]

Небольшие модификации, введенные в 1972 г. С. Коэном с сотрудниками в описанную методику, позволили осуществить трансформацию клеток, обработанных хлоридом кальция, плазмидными ДНК. При этом компетентность индуцировалась лишь у 0,1-1 % клеток культуры Е. oli. Дальнейшие исследования показали, что частоту плазмидной трансформации можно повысить разными способами подвергая смесь обработанных СаС1г клеток и ДНК тепловому шоку (42 °С) вводя в эту смесь моновалентные катионы обрабатывая клетки дополнительно органическими растворителями, сульфгидрильными реагентами выращивая клетки в среде с повышенным содержанием Mg2+ и др. Кропотливая систематическая работа по подбору штаммов и модификации кальциевой методики позволяет в ряде случаев повышать частоту плазмидной трансформации с 10 5 до 10 3 трансформантов на молекулу плазмиды. [c.84]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология