Гетеродуплексное картирование

ДНК с известными генетически картированными делециями и добавками (рис. 7.11). Такой гетеродуплексный анализ позволяет построить физическую карту параллельно с генетической картой на рис. 7.7. Поскольку известна общая длина молекулы ДНК X (она составляет около 49 ООО н. п.), можно определить примерную величину каждого гена. [c.213]

Если двум частично комплементарным цепям плазмидной ДНК дать возможность ренатурировать, то образуются гетеродуплексные молекулы, которые можно исследовать с помощью электронного микроскопа. Поскольку при электронно-микроскопическом анализе в случае соответствующего приготовления образцов одно-и двухцепочечные участки нуклеиновых кислот различаются, существует возможность картирования гомологичных и негомологичных участков. С тех пор как в практику вошли способы проверки с применением рестриктаз и методы выявления гомологий ДНК в растворе по радиоактивности, методология гетеродуплексного анализа с помощью электронного микроскопа перестала широко применяться для анализа плазмидной ДНК- Хотя техника такого анализа требует большого экспериментального искусства и специального оборудования, она все же заслуживает рекомендации как способ точной локализации различий между плазмидами и наилучшей оценки организации плазмидной ДНК- [c.156]

Протяженность делеций можно определить несколькими способами. Первый из них заключается в том, что попарно скрещивают между собой фаги с различными делециями. Второй состоит в их картировании с помощью гетеродуплексного анализа. Третий заключается в том, чтобы испытать каждую делению на способность рекомбинировать с точковыми мутациями и на основании этих данных построить карту делений. Если есть время, то можно попробовать все эти методы. Как проводить картирование, подробно описано в методике 10. Поскольку нас интересует ген -лактамазы, то для выявления тех актов рекомбинации, которые привели к появлению устойчивости к ампициллину, можно использовать чащки Red (методика 7) или лизогенизацию с последующей проверкой на устойчивость к этому антибиотику. [c.39]

Рис. 7.7. Геном фага А,. Гены, существенные для развития фага, обозначены строчными буквами. А, Процентная шкала расстояний вдоль молекулы ДНК. Б. Генетическая карта, построенная на основании частот рекомбинации. В. Физическая карта, основанная на гетероду-плексном анализе. Г. Некоторые из перестроек, использованные при гетеродуплексном картировании gal и bio-замещения, делеции и замены, влияющие на иммунные свойства фагов лямбдоидного семейства. Д. Распределение генетических функций в геноме.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология