Компетентность бактерий искусственная

У наиболее важной для генной инженерии грамположительной бактерии В. subtilis компетентность в искусственных условиях можно развить, выращивая клетки в специальных минимальных питательных средах, содержащих глюкозу в качестве источника углерода, а также ионы Mg2+ и Са + [207]. Ионы Mg2+ необходимы для активации специфических нуклеаз, участвующих в захвате экзогенной ДНК. Одним из практических способов достижения компетентности является двухступенчатое понижение скорости роста клеток в культуре. Биосинтетические процессы в компетентных клетках замедлены, что может проявляться, в ча- [c.144]

Клетки Е. сой не обладают природной компетентностью. Однако ввиду важности этого организма для молекулярной генетики, были разработаны методы, позволяющие придавать Е. соИ искусственную компетентность. При искусственной компетентности трансформирующие плазмиды взаимодействуют со специфическими каналами на внешней поверхности клеток. Каждая клетка обладает 10-200 каналами, обеспечивающими транспорт питательных веществ и других ингредиентов, необходимых для роста и размножения бактерий. В опытах по конкуренции трансформирующей плазмиды pBR322 и ее производной pXf 1 было установлено, что когда их смешивают в отношении 1 1000 (в сумме 10 молекул на клетку), это никак не сказывается на эффективности трансформации pBR322. Уменьшение этой пропорции до 1 10 ООО или 1 100 ООО (100 молекул на клетку) понижало эффективность трансформации лишь на 60 и 80%, соответственно. Это показывает, что имеется много каналов для проникновения ДНК, а сами клетки должны конкурировать друг с другом за ее захват. [c.148]

Трансформация — важный метод генетического анализа, так как имеющиеся в природе способные к трансформации виды не имеют систем конъюгации, и только небольшое число видов имеет хорошо развитые системы трансдукции. В аспекте фундаментальной науки трансформация позволила составить представление о механизме генетической рекомбинации [25, 31], а в случае Ba illus subtilis ее изучение способствовало получению информации о начале и направлении репликации хромосомы [18]. Данные экспериментов по внутривидовой и межвидовой трансформации использовались также для определения степени генетического родства между определенными участками генома [31]. Такой подход стимулировал изучение родства с использованием анализа кинетики реассоциации ДНК (гл. 22) и новейших методических приемов при исследовании рекомбинантной ДНК. Использование трансформации и трансдукции тесно связано с методологией изучения рекомбинантной ДНК, где благодаря искусственной индукции компетентности возможно введение рекомбинантных молекул в клетки различных видов бактерий. [c.80]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология