Кинетика реассоциации, анализ

Кинетика гибридизации второго порядка нескольких очишенных гомогенных препаратов ДНК представлена на рис. 7.27. Как и во многих эю пери-ментах по гибридизации, ДНК перед денатурацией и реассоциацией была разрезана на фрагменты длиной около 400 пар оснований. Обратите внимание на то, что шкала ot логарифмическая это облегчает сравнительный анализ данных. Соответствие кинетических кривых простой реакции второго порядка следует из того, что ренатурация на 90% укладывается в интервал значений ot, охватывающий два порядка величины. [c.340]

На рис. 17.4 приведена зависимость между размером генома, определенным по кинетике реассоциации неповторяющейся ДНК, и содержанием ДНК на гаплоидный геном, определенным с помощью химического анализа. Данные хорошо согласуются. Это подтверждает высказанное выше предположение о том, что неповторяющаяся ДНК действительно состоит из индивидуальных последовательностей, присутствующих в геноме в виде только одной копии. [c.226]

Трансформация — важный метод генетического анализа, так как имеющиеся в природе способные к трансформации виды не имеют систем конъюгации, и только небольшое число видов имеет хорошо развитые системы трансдукции. В аспекте фундаментальной науки трансформация позволила составить представление о механизме генетической рекомбинации [25, 31], а в случае Ba illus subtilis ее изучение способствовало получению информации о начале и направлении репликации хромосомы [18]. Данные экспериментов по внутривидовой и межвидовой трансформации использовались также для определения степени генетического родства между определенными участками генома [31]. Такой подход стимулировал изучение родства с использованием анализа кинетики реассоциации ДНК (гл. 22) и новейших методических приемов при исследовании рекомбинантной ДНК. Использование трансформации и трансдукции тесно связано с методологией изучения рекомбинантной ДНК, где благодаря искусственной индукции компетентности возможно введение рекомбинантных молекул в клетки различных видов бактерий. [c.80]

Сателлитные последовательности у быка и мыши. У быка известны восемь разных сателлитных последовательностей (рис. 9.28). Все вместе они составляют более 23% геномной ДНК и, судя по кинетике реассоциации, занимают промежуточное положение между высоко- и умеренноповторяющимися последовательностями (см. разд. 9.1.6). Повторяющиеся единицы представлены набором взаимосвязанных последовательностей. Секвенирование показало, что по меньшей мере пять из восьми сателлитов содержат одну или более одинаковых последовательностей, хотя и дивергиро-вавших настолько, что не гибридизуются между собой, а рестрикционный анализ не выявляет их родства. Длина повторяющейся единицы у большинства сателлитов быка превышает 1 т. п. н. Внутри этих длинных повторяющихся единиц имеются повторы, встречающиеся более часто. [c.192]

Классический анализ кинетики реассоциации показал, что для геномов человека и других млекопитающих характерно присутствие коротких, часто встречающихся повторов. Об этом же свидетельствуют те данные на молекулярном уровне, которые были получены с помощью рестрикцион- [c.200]

Анализ кинетики ассоциации. На кривых реассоциации геномной ДНК повторяющимся последовательностям соответствуют участки с низким и средним значениями ot, а уникальным участок с высоким ot (гл. 7.5.6). Если для определения доли реассоциированной ДНК используется гидро-ксилапатит, то двухцепочечными считаются как частично, так и полностью ренатурировавшие молекулы (рис. 9.34). В результате мы получаем кажущееся увеличение доли геномной ДНК, реассоциирующей при низких и средних значениях ot, при увеличении длины фрагментов ДНК. Это происходит потому, что повторяющиеся последовательности, которые реассоциируют при относительно низких ot, рассеяны по геному среди последовательностей с низким числом копий (рис. 9.35). В опытах, о которых идет речь, определяется зависимость доли ДНК, считающейся двухцепочечной по данным связывания с гидроксилапатитом, от длины фрагментов ДНК. Чтобы получить препараты молекул ДНК разной длины, суммарную ДНК фрагментируют случайным образом и затем разделяют по размерам центрифугированием в градиенте плотности. Фрагменты денатурируют и отжигают при фиксированных значениях ot, слишком низких для реассоциации уникальных одно-копийных последовательностей. [c.198]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология