Лигазная цепная реакция

Более простым, хотя и менее чувствительным вариантом ПЦР/ЛОЗ является метод лигазной цепной реакции. Тестируемую ДНК смешивают с избытком двух индикаторных зондов, описанных выше, в присутствии термостабильной ДНК-лигазы. Проводят лигирование при 65 °С, затем повышают температуру до 94 °С, чтобы произошла денатурация образовавшихся гибридов зонд-ДНК-мишень, и вновь понижают температуру до 65 °С для гибридизации свободных нелигированных индикаторных ЛОЗ-зондов с ДНК-мишенью. Этот цикл повторяют 20 раз. Если иггдикаторные ЛОЗ-зонды полностью комплементарны ДНК-мишени, то лигирование будет происходить в каждом цикле, и после 20 циклов накопится достаточно продуктов лигирования ( сшитых зондов X и Y) для того, чтобы их можно было обнаружить с помощью электрофореза или ELISA. Если комплементарность неполная, то лигирование не произойдет и никаких продуктов зарегистрировано не будет. [c.198]

Для определения ДНК HBV разработано несколько методов (метод гибридизации, метод гибридизации с усилением сигнала, лигазная цепная реакция и др.), но наибольшее распространение получил метод ПЦР. Его считают арбитражным (референс-методом). Он дополняет метод ИФА-диагностики при бессимптомных, хронических и микст-инфекциях, в других неясных случаях. Количественный вариант ПЦР наиболее часто используют для оценки уровня виремии у хронических больных, получающих антивирусные препараты, и определения эффективности терапии. В качестве мишени для праймеров служат консервативные участки генома вируса ( У и С). [c.304]

Использование ДНК-лигаз для проведения лигазной цепной реакции рассматривается в разделе 6.6.1 этой части книги [85]. [c.62]

Лигазная цепная реакция [c.241]

Способность ДНК-лигаз восстанавливать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах двухцепочечных молекул ДНК используется при проведении лигазной цепной реакции - ЛЦР (ligase hain rea tion - L R) [85, 322, 323]. Для этого синтезируют два олигонуклеотида, комплементарные непрерывной последовательности нуклеотидов ДНК, которые после гибридизации с такой последовательностью примыкают друг к другу и разделены лишь одноцепочечным разрывом. При этом З -конец предшествующего нуклеотида должен содержать свободную У-ОН-группу, а в 5 -положении 5 -конца олигонуклеотида, следующего за ним, должна находиться фосфатная группа. [c.241]

Примечание. QPR-QP-репликация, L R - лигазная цепная реакция, 3SR-изотермическая самоподдерживающаяся репликация последовательностей, SDA -амплификация с замещением цепи ДНК [c.249]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология