Комплемент тест на фиксацию

Многие вещества могут быть определены по их способности ингибировать реакции антиген — антитело. Это особенно широко используется при анализе гаптенов, поскольку гаптены обычно реагируют с антителом без фиксации комплемента. Поэтому прямое определение гаптенов по фиксации комплемента невозможно. Однако, если реакция антиген — антитело проводится таким образом, что все антитела полностью связываются антигеном и весь комплемент фиксирован, любой агент, который может связывать антитело без фиксации комплемента, можно определить по восстановлению количества фиксированного комплемента. Таким образом, если с антигеном добавляется гаптен, дающий перекрестную реакцию, этот гаптен может конкурировать с антигеном за центр связывания антигена с антителом и, следовательно, снижать количество фиксируемого комплемента. Путем прибавления различных количеств данного гаптена к данной смеси антиген-антитело можно получить калибровочную кривую, которую затем можно использовать для определения неизвестного количества того же гаптена в смеси. Эта процедура называется тестом торможения фиксации комплемента. Пример показан на рис. 10-5. [c.256]

ИФМ имеет ряд существенных преимуществ перед цитоток-сическими тестами, ELISA и РИА. Во-первых, с помощью ИФМ можно определять молекулы, присутствующие на клеточных поверхностях с плотностью до нескольких тысяч копий на клетку. Во многих случаях, когда методы ELISA на клеточных поверхностях, цитотоксические тесты или РИА оказываются недостаточно чувствительными, антигены плазматической мембраны удается определить с помощью ИФМ. Во-вторых, при исследовании ИФМ имеется возможность достаточно просто детектировать антитела практически всех классов иммуноглобулинов. Например, в настоящее время имеется несколько видов мышиных МА против каппа-легких цепей иммуноглобулинов крыс. Поскольку от 90 до 95% всех иммуноглобулинов крыс содержат каппа-легкую цепь, эти МА существенно улучшают возможности скрининга. В отличие от этого в цитотоксических тестах желательно, чтобы МА принадлежали к классу IgM, так как при этом фиксация комплемента обеспечивается с наибольшей эффективностью. В-третьих, при проведении ИФМ на проточном флуорометрическом клеточном сортере (ПФКС) для каждого определения связывания антител анализируется большое число клеток. Если для каждого образца имеется возможность просчитывать 5—10-10 клеток, то значительно уменьшается вероятность ошибок. [c.179]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология