ДНК фага срХ была определена с помощью

Пример 7-В. Анализ комплементарности одноцепочечных ДНК. Фильтры, содержащие нерадиоактивную связанную одноцепочечную ДНК, приготовленные, как в примере 7-Б, можно использовать для анализа комплементарности одноцепочечной ДНК. Однако при добавлении к таким фильтрам радиоактивной одноцепочечной ДНК естественно будет происходить связывание, независимо от того, имеется ли на фильтре или нет предварительно связанная с ним ДНК (табл. 7-1). Тем не менее, если промыть фильтр, уже содержащий нерадиоактивную ДНК, АБС и поливинилпирролидоном, свободные места связывания одноцепочечной ДНК будут блокированы, т. е. радиоактивная одноцепочечная ДНК не сможет связываться по ним. При погружении предварительно обработанного таким образом фильтра в раствор, содержащий радиоактивную ДНК, в условиях, способствующих гибридизации, как в примере 7-Б, комплементарная радиоактивная ДНК будет ренатурировать с предварительно связанной ДНК. Несвязавшаяся ДНК может быть затем отмыта, что даст возможность определить связанную радиоактивность. Такой метод можно использовать для идентификации некоторых видов ДНК. Например, если бактерию Е.соИ инфицировать фагом Х и инкубировать затем в среде, содержащей Н-тимидин, будут синтезироваться ДНК как Е.соИ, так и фага К. Если затем радиоактивную ДНК превратить в одноцепочечную ДНК (с помощью термической или щелочной денатурации) и ренатурировать на фильтре, с которым связана ДНК Е. соН или фага К, относительное количество радиоактивности, связывающееся на фильтре в каждом случае, будет указывать долю каждой ДНК в начальной радиоактивной смеси. [c.163]

Модель в какой-то степени напоминает механизм, участвующий в аттенуации транскрипции, при котором альтернативные способы спаривания последовательности РНК позволяют или предотвращают образование вторичной структуры, необходимой для терминации транскрипции, осуществляемой РНК-полимеразой (гл. 15). Формально эта модель равнозначна постулированию присутствия в клетке репрессора, который подавляет функционирование вновь введенной ДНК, аналогично репрессору фага лямбда (гл. 16). Вместо белка-репрессора, который связывает новую ДНК, РНК связывает вновь синтезированный предшественник РНК-затравки. Способность РНК I подавлять инициацию репликации может быть частью цикла негативного контроля, с помощью которого несовместимость связана с контролем числа копий. Однако мы еще не знаем роли этих ( обытий в поддержании характерного числа копий olEl ДНК (примерно 20 на 1 клетку). Возможно, она определяется соотношением между частотой инициации РНК-затравки и способностью затравки запускать синтез ДНК. Этот тип несовместимости может быть следствием событий, используемых для регуляции репликации. Вполне вероятно также, что несовместимость является результатом механизмов, с помощью которых при делении плазмиды распределяются между дочерними клетками. [c.408]

Установление точек действия различных рестриктаз позволяет проводить физическое картирование участков молекулы ДНК и небольших геномов (плазмид вирусов). Распределение сайтов рестрикции представляет собой своеобразный паспорт каждого фрагмента ДНК и может быть использовано для его идентификации. Принцип рестрикционного картирования сводится к получению перекрывающихся по размеру фрагментов, которые разделяют при помощи электрофореза в агарозном или полиакриламидном геле. Молекулярную массу фрагментов обычно определяют, используя в качестве свидетеля ДНК известного размера. На электрофо-реграмме рестрикты-фрагменты ДНК различают, окрашивая их бромистым этидием и просматривая гель в ультрафиолетовом свете. Применяют также радиоактивное мечение концов фрагментов с помощью полинуклеотидкиназы фага Т4. [c.283]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология