Токсин, кривая связывания

Рис. 6-11. Кривые связывания токсина в присутствии и в отсутствие тетродотоксина (задача 6-27).

Чтобы провести измерение, вы инкубируете идентичные сегменты нерва в течение 8 ч в присутствии увеличивающихся количеств меченого токсина. Затем вы отмываете сегменты (для удаления свободного токсина) и измеряете радиоактивность, связанную с сегментами нервов, чтобы снять кривую связывания токсина. Она показана на рис. 6-11 (верхняя кривая). Вас удивляет, почему не наблюдается ожидаемого максимума связывания (насыщения) при высоких концентрациях токсина, т. е. почему не достигается плато. Действительно, связывание продолжало возрастать с той же скоростью даже при высоких концентрациях токсина (верхняя кривая). По размышлении вы ставите контрольный опыт, в котором измеряете связывание меченого токсина в присутствии избытка немеченого токсина. Результаты, показанные на рис. 6-11 (нижняя кривая), сразу все проясняют и позволяют вам рассчитать число Na +-каналов в мембране аксона блуждающего нерва. [c.63]

Рис. 6-16. Кривая специфического связывания токсина (ответ 6-27).

А. Отсутствие насыщения при связывании токсина указывает на то, что токсин связывается в препарате дополнительно с чем-то еще кроме рецепторного участка. Такие дополнительные участки не являются специфическими для токсина, в противном случае должно было бы в конце концов наступить их насыщение, чего не происходит. Чтобы оценить масштаб неспецифического связывания, и был поставлен контрольный эксперимент. В нем добавление избыточного количества нерадиоактивного токсина приводит к освобождению меченого токсина, связавшегося со специфическими рецепторными участками. Следовательно, при большом молярном избытке немеченого токсина подавляющая часть связанного с рецептором токсина становится немеченой, т.е. молекулы немеченого токсина конкурируют с молекулами меченого токсина за участки специфического связывания. В то же время в участках неспецифического связывания вследствие фактической неограниченности их числа немеченый токсин не влияет на связывание меченого токсина. Следовательно, немеченый токсин не конкурирует с меченым за неспецифические участки. Таким образом, в присутствии немеченого токсина нервные клетки ведут себя по отношению к меченому лиганду так, как если бы они не имели Ма -каналов. В результате радиоактивный токсин связывается только неспецифически. Вычитая неспецифическую компоненту из общего связывания, получим кривую специфического связывания она, как и ожидалось, показывает насыщение (рис. 6-16). [c.326]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология