Лиганды меченые

Вопрос о механизме рацемизации в этих системах был окончательно решен при помощи исследовапия обмена координированных лигандов с лигандами, меченными изотопами [162]. Скорость обмена, полученную в результате этого исследования, сравнивали со скоростью рацемизации, определенной при тех же экспериментальных условиях. Б онстанта скорости рацемизации к, исходя из равновесия [c.272]

Используя лиганды, меченные радиоактивными атомами, флуоресцентными красителями или электроноплотными частицами (типа коллоидного золота), можно изучать распределение рецепторов на поверхности клетки. Было показано, что число рецепторов для конкретного лиганда может варьировать в пределах от 500 до более чем 100000 на клетку и что они либо располагаются на мембране случайным образом, либо сосредоточены в определенных ее участках. Подобно другим мембранным белкам, рецепторы клеточной иоверхности с трудом поддаются вьщелению в чистом виде и изучению, особенно в связи с тем, что они составляют менее 0,1% обшей массы белка плазматической мембраны. Методы клонирования носледовательностей ДПК, кодирующих поверхностные рецепторы, и здесь позволили преодолеть многие трудности и в корне изменили наши представления о структуре и функциях рецепторов. [c.353]

В этом варианте анализа фермент используют не ради усиления сигнала, а только для выявления и количественного определения свободного лиганда, меченного субстратом. Очевидно, максимальный сигнал, который можно получить, задается концентрацией свободного, несвязанного конъюгата [субстрат— лиганд]. Эта концентрация в свою очередь зависит от концентрации лиганда в анализируемом образце и должна быть сопоставима с ней. Для получения сигналов, поддающихся измерению, в качестве метки лигандов и антигенов следует использовать флуорогенные субстраты. [c.17]

Используя лиганды, меченные радиоактивными атомами, флуоресцентными красителями или электроноплотными молекулами (например, ферритином), мы можем изучать количество, расположение и свойства поверхностных рецепторов, а также прослеживать судьбу образующегося комплекса рецептора с лигандом. [c.52]

Во многих случаях для связывания с нерастворимыми носителями использовались аффинные лиганды, меченные радиоактивными изотопами. Связанный аффинный лиганд легко определяется на основе измерения радиоактивности. Например, Грин и Соме [30] определили таким образом количество биотина, связанного с сефарозой. [c.249]

КО полупериод замещения в Fe (рЬеп)з при 25 °С равен 1,4 X 10 с и лабильность Ре(Ме2Ыру)з отличается, вероятно, не очень значительно. Проведя эксперимент, в котором окислительно-восстановительная реакция проходила бы С участием свободного лиганда, меченного можно было бы также убедиться в отсутствии переноса лиганда между окислителем и восстановителем. И хотя для убедительной демонстрации неизменяемости координационной оболочки в ходе реакций окисления-восстановления необходимо подобрать такие вещества, для которых эти реакции протекают быстрее, чем процесс замещения, нельзя считать, что неизменяемость внешней среды присуща лишь окислительно-восстановительным реакциям. Известно очень много примеров того, что замещение во внешних координационных оболочках реакционных веществ происходит легко и быстро, и тем не менее реакция окисления-восстановления протекает. Вопрос о том, как же различать механизмы реакций во внешней и во внутренней сферах, когда и в окислителе, и в восстановителе, и в продуктах реакции замещение происходит быстро, будет рассмотрен в этой главе несколько позднее. [c.187]

Рассмотрим теперь, как можно учесть неспецифическое связывание при определении равновесных констант комплексообразования конкурентными методами. Для примера остановимся на методе вытеснения двумя одновалентными лигандами меченого лиганда (с. 251) (Blondeau et al., 1978). В присутствии неспецифичеокого связывания (практически ненасыщаемого) имеем [c.298]

Уже обнаружено более 25 различных рецепторов для разных молекул, участвуюгцих в эндоцитозе. Все они. по-видимому, используют тот же путь через окаймленные ямки. Многие из этих рецепторов встраиваются в окаймленные ямки безотносительно того, связаны ли они со специфическими лигандами или нет. Не все белки плазматической мембраны находятся в окаймленных ямках. Это означает, что ямки работают как молекулярные фильтры, собирающие на своей поверхности определенные белки плазматической мембраны и исключающие присутствие других. Электронно-микроскопические исследования клеток, выращенных в среде с различными лигандами (меченными для того, чтобы различать их при электронной микроскопии), показали, что в одной и той же окаймленной ямке содержится множество видов рецепторов. На участке плазматической мембраны окаймленной ямки может собраться, вероятно, около 1000 рецепторов разных видов. Все комплексы рецепторов с лигандами, утилизируемые в процессе эндоцитоза через окаймленные клатриновые пузырьки, очевидно попадают в дальнейшем в одну и ту же эндосому Однако последующая судьба этих молекул определяется типом рецептора. [c.415]

Используя лиганды, меченные радиоактивньши атомами, флуоресцентными красителями или электроноплотными молекулами (например, феррити-ном), сейчас можно изучать количество, расположение и свойства поверхностных рецепторов, а также прослеживать судьбу образующегося комплекса рецептора с лигандом. Было показано, что число рецепторов конкретного лиганда может варьировать в пределах от 500 до более чем 100000 на клетку и что сразу после связывания лиганда рецепторы могут либо располагаться на плазматической мембране случайным образом, либо скапливаться в определенных ее участках. [c.261]

Рис. 6-4. Синтез определяемого лиганда, меченного р-ККГ, через аромежу-точную стадию образования Ы-гидроксисукцинимидногб эфира.

Наибольшее распространение в радиорецепторных исследованиях получили лиганды, меченные Ш или Ч. Некоторые радиоактивные изотопы, применяемые для радиорецепторных исследований, приведены в табл. 3.25 [11]. [c.461]

Этот метод позволяет прямо измерить концентрацию свободного и связанного с ферментом лиганда. Раствор фермента (и лиганда) отделяют от раствора лиганда при помощи полупроницаемой мембраны, через которую могут проходить только небольшие молекулы. После установления равновесия, отобрав пробу из ячейки, содержащей белок, определяют сумму концентраций свободного и связанного лиганда анализ пробы из другой ячейки дает концентрацию только свободного субстрата. Измерения можно проводить, используя лиганды, меченные радиоактивными изотопами, и ячейки объемом всего 20 мкл. Для анализа отбирают три образца по 5 мкл. Однако, поскольку для достижения равновесия даже при работе с самыми крупнопористыми мембранами требуется по крайней мере —2 ч, этот метод непригоден для исследования нестабильных лигандов и фермец- [c.202]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология