ДНК-полимераза I oli реакция ник-трансляции

Реакцию трансляции от разрыва следует вести при пониженной против обычной температуре (14—15°). При температурах выше 22° ДНК-полимераза I ведет не только замену нуклеотидов, но и некоторый дополнительный синтез ДНК, по-видимому, за счет смещения нитей. Последнее связывают с тем, что экзо-нуклеазная активность фермента более термолабильна, чем синтетическая. Включение радиоактивности в ДНК линейно зависит от концентрации радиоактивного трифосфата в смеси (при условии избытка немеченных трифосфатов) вплоть до соотношения 1 нмоль меченого трифосфата на 1 мкг ДНК. [c.259]

На специфическом подавлении отдельных стадий биосинтеза белка основано действие ряда антибиотиков (разд. 2.3.5). Так, актиномицин интер-коляцией и рифамицин селективным подавлением РНК-полимеразы нарушают процесс транскрипции. Хлорамфеникол нарушает трансляцию, блокируя реакцию переноса пептидила в рибосоме. Стрептомицин ассоциирует с 30 8-субъединицей рибосомы и ведет к ошибкам в переносе, а очень похожий на аминоацильный конец тРНК пуромицин вызывает преждевременный обрыв синтезируемой цепи. [c.398]

Если описанные ферментативные реакции позволяют осуществить включение Р только на один из заранее известных концов молекулы ДНК или РНК, то рассматриваемая ниже система позволяет получить нити ДНК, в которых практически весь фосфор представлен радиоактивным изотопом. Фермент ДНК-полимераза I из Е. соИ, которому вначале приписывали функцию репликации, на самом деле играет основную роль в репарации ДНК. Особенно эффективно он начинает комплементарный синтез ДНК в точке разрыва одной из нитей, используя вторую нить в качестве матрицы. Такой синтез можно условно назвать трансляцией от разрыва . В английской литературе этот процесс называют ni k translation ( ni k — разрыв, щель). Трансляция идет в направлении 5 - 3 достраиваемой разорванной нити, т. е. начиная от З -ОН-конца этой нити в месте разрыва. Как и для любого матричного синтеза ДНК, в качестве субстратов необходимы все четыре дезоксирибонуклеозид-трифосфата. [c.258]

ДНК-полимераза IЕ. соИ после связывания с двухцепочечной ДНК в месте одноцепочечного разрыва в присутствии необходимых де-зоксинуклеозидтрифосфатов катализирует одновременно две реакции — 5 -3 -экзонуклеаз-ный гидролиз разорванной цепи молекулы ДНК и 5 -3 -полимеразную реакцию. При этом происходит перенос одноцепочечного разрыва вдоль молекулы ДНК, который иначе называется ник-трансляцией. Заменяя в реакции ник- [c.24]

Реакцию синтеза ДНК с участием ДНК-полимеразы (например в ПЦР) часто называют самовоспроизведением ДНК, а молекулу ДНК — единственной самовос-производящейся молекулой. В действительности самовоспроизведение — свойство гораздо более сложных систем. В самом деле, в репликации ДНК обязательно участие ДНК-полимеразы, причем этот фермент не только катализирует образование 3, 5 -фосфодиэфирной связи, но и определяет, наряду с ДНК-матрицей, правильный выбор очередного нуклеотида. Иначе говоря, ДНК не сама воспроизводится, а синтезируется аппаратом, содержащим ДНК-матрицу и белок ДНК-полимеразу. И эта двухкомпонетная система не самовоспроизводится, поскольку количество ДНК-полимеразы не увеличивается (наоборот — уменьшается в результате денатурации соответственно убывает скорость репликации). Для того, чтобы эта система самовоспроизводилась, ьгужен механизм синтеза ДНК-полимеразы. А для этого требуется наличие гена ДНК-полимеразы в ДНК-матрице, и еще множества генов, кодирующих белки, необходимые для экспрессии (транскрипции и трансляции) всех этих генов. Колоссальное усложнение системы Однако и это далеко не все. Многие вещества, необходимые для самовоспроизведения, нестабильны, и в пище практически отсутствуют, например ьгуклеозидтрифосфаты), следовательно должны быть механизмы их образования в самой системе, т. е. нужен метаболизм. А это значит, что требуется еще много генов и соответствующих белков. [c.188]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология