Нитроцеллюлозные фильтры и анализ связывания

Важный подход к анализу связывания ДНК с белками основан на изучении связывания их с нитроцеллюлозными фильтрами (рис. 4.11). Этот метод позволяет аккуратно определять концентрации компонентов в состоянии равновесия и кинетические параметры реакций. [c.97]

Нитроцеллюлозные фильтры и анализ связывания [c.160]

Желательно предварительно проверять имеющиеся препараты моноклональных антител на их пригодность для обнаружения антигенов на блоте. Для этого можно использовать специальный прибор для микротитрования с системой прокачивания растворов (типа прибора Bio Dot фирмы Bio Rad). Искомый антиген как нативный, так и денатурированный наносят на нитроцеллюлозные фильтры в виде небольших пятен (так называемый дот-анализ). Обрабатывая такие фильтры различными препаратами моноклональных антител, можно отобрать такие препараты, которые взаимодействуют с денатурированным антигеном и, следовательно, пригодны для проявления соответствующих блотов. Моноклональные антитела, не реагирующие с денатурированным антигеном, отбрасывают или подвергают дополнительной проверке, варьируя условия связывания и отмывки. [c.354]

Нитроцеллюлозные фильтры в определенных условиях способны связывать белки и одноцепочечные ДНК. Такое связывание может найти применение для большого числа ферментативных и физико-химических анализов, а также в качестве метода очистки различных препаратов. Связывающие свойства двух коммерческих нитроцеллюлозных фильтров представлены в табл. 7-1. Следует заметить, что связывание белков не зависит от ионной силы, однако одноцепочечные ДНК прочно удерживаются такими фильтрами только при относительно высокой ионной силе. Плохое связывание одноцепочечных ДНК с фильтром Millipore необъяснимо, хотя, может быть, оно обусловлено тем, что эти фильтры изготовлены не из чистой нитроцеллюлозы. РНК не связываются с этими фильтрами. [c.160]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология