Иммунологическое обнаружение антигенов и антител

Важным аспектом в проведении иммунологических исследований является подбор источников антигенов для выявления противовирусных антител. В доступных коммерческих тест-системах для обнаружения антител IgM vi IgG к вирусу 5-19 используются рекомбинантные антигены — аналоги белков вируса VPX и VP2. Следует отметить, что использование синтетических пептидов снижает чувствительность метода. [c.309]

Обнаружение специфических IgM к вирусу краснухи имеет важное значение при постановке диагноза первичной и врожденной инфекций. Существует множество методов определения и идентификации таких антител. В основе ранее применяемых методов лежит разделение сывороточных IgG и IgM гель-фильтрацией или центрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Полученные фракции тестируют в РТГА на присутствие специфических иммуноглобулинов. В последнее время эти методы заменены чисто иммунологическими методами, которые не требуют фракционирования сыворотки. Существуют два основных варианта этих методов. Первый предполагает идентификацию иммобилизованного антигена. При этом антиген вируса краснухи связывают с поверхностью пластика (например, дном лунки 96-луночного планшета), инкубируют его с сывороткой пациентов, а затем с меченными антителами против IgM человека, содержащихся в исследуемой сыворотке. Если после [c.327]

Хотя подход с использованием синтетических пептидов обладает значительными потенциальными возможностями, остается неразрешенным ряд реальных или теоретических препятствий. Слабая антигенная активность большинства синтетических пептидов вынуждает для усиления иммунного ответа использовать в экспериментальных исследованиях на животных адъювант Фрейнда. В связи с тем что на людях адъювант Фрейнда использовать нельзя, для клинического применения синтетических пептидов необходимо обнаружение или разработка эффективных адъювантов, пригодных для человека. Не исключено, что одного пептида будет недостаточно для индукции резистентности, так как большие поверхностные антигены обычно содержат несколько различных иммунологических доменов, вызывающих защитный гуморальный и (или) клеточный ответ [15, 197]. Иногда идентификация небольших защищающих пептидов может оказаться невозможной, как, например, пептидов гемагглютинина вируса гриппа А, которые стимулировали бы образование антител, эффективно нейтрализующих инфекционность вируса [58, 70, 119]. Можно также предсказать трудности в стимуляции иммунного ответа к эпитопам, которые сформированы в результате сближения разных участков линейной белковой молекулы. Наконец, ожидаемому анти-тельному ответу у значительной части населения может препятствовать полиморфизм антигенов гистосовместимости класса II, контролирующих ответ на синтетические антигены [168]. Однако, поскольку уже достигнута защита на одной экспериментальной модели, можно надеяться на получение иммуногенных препаратов, активных в отношении других вирусов. [c.154]

Другие методы идентификации рекомбинантных плазмид основаны на экспрессии включенного в них гена. При этом идентифицируется белковый продукт, для чего используются иммунологические методы или методы определения его специфической активности. Для обнаружения антигенов в бактериях путем скрининга, на основе специфического их взаимодействия с антителами, часто используется метод, разработанный Брумом и Джилбертом. Для этого пластиковый диск покрывают слоем специфических радиоактивных антител и помещают его на предварительно лизированные колонии. Антигены из лизиро-ванных бактерий связываются с антителами на диске. Положение антигенов, адсорбированных на диске, определяют с помощью радиоавтографии. [c.316]

Прежде всего дадим краткую характеристику некоторых часто используемых в анализе понятий предел обнаружения, длительность, точность и специфичность. В зависимости от задач разрабатываемого анализа эти параметры могут варьироваться в достаточно широких пределах. Как и все иммунохимические методы, ИФА основан на реакции взаимодействия антиген — антитело, закономерности которой в значительной степени обусловливают возможность достижения необходимых значений перечисленных параметров. Каждая схема ИФА представляет определенную комбинацию иммунологических реакций, проходящих одновременно или последовательно. В связи с этим различные методы ИФА имеют свои особенности и в большинстве случаев описываются разными уравнениями. В этом разделе сначала будут кратко даиы сведения об основных характеристиках ИФА, а затем более детально рассмотрены закономерности нескольких наиболее широко используемых схем анализа. Основное В1.ама11ие при этом будет уделено закономерностям иммунохимических стадий анализа, что представляет интерес как для [c.223]

Альтернативный путь для разработки гомогенных методов иммуноанализа был предложен нами и другими исследовательскими группами. Этот подход, который мы первоначально назвали иммуноанализом на непрерывной поверхности [7], основан на контроле протекания реакции антиген-антитело после и (или) во время связывания с непрерывной поверхностью, которая является частью системы обнаружения сигнала. Принцип действия этих иммуносенсоров включает иммобилизацию одного из иммунореагентов на поверхности сенсора, которая изготовлена таким образом, что она приобрела чувствительность к некоторым компонентам или продуктам реакции. Для обнаружения иммунологических реакций на непрерывной поверхности использовались как электрохимические, так и оптические методы. Электрохимические методы описаны в гл. 15. В нашем обзоре внимание сконцентрировано на оптических системах, и в частности на использовании явления < полного внутреннего отражения в гомогенных методах иммуноанализа. [c.238]

Поиск нейронспецифических белков, связанных с генетическими нервными заболеваниями, очень сложен, однако перспективен. Примером является белок Pel Duarte (специфический белок мозга), наличие которого связывают с заболеванием шизофренией [12]. Все возрастающее число специфических компонентов нервной системы открываютс помощью иммунологических методов. Так как их функция неизвестна, они обозначаются символами NS1, NS2, L1 и т. д. (NS — антиген нервной системы). Применение техники моноклональных антител ведет к открытию антигенов клеточной поверхности, специфичных для различных типов клеток нервной системы. Таким способом обнаружен фактор адгезии нейрональных клеток (N- AM), который, по-видимому, играет важную роль в развитии нервной системы [13]. Мы вернемся к этому в следующей главе. Установлено, что мозг экспрессирует 30 ООО генов, продукты которых все еще ждут исследования. [c.315]

Больше всего анализов выполняется для обнаружения поверхностных антигенов гепатита В и антител к ВИЧ. Различные типы иммуноанализа, используемые в микробиологических и иммунологических лабораториях, представлены в табл. 1.4. Наибольшая доля анализов приходится на такие хорошо известные методы, как латексная агглютинация и реакция связывания комплемента. Маловероятно, что в ближайшее время их позиции будут сильно потеснены другими недавнр разработанными методами. [c.15]

Экспериментальные данные, свидететьствующие о существовании антирецепторов, и уже имеющиеся сведения об их биологической функции открывают новые перспективы для понимания взаимосвязей клетки (организма) с внешним миром в условиях нормы и патологии. Рассматривая проблему антиидиотипических антител, видный иммунолог Н. Ерне и его последователи сформулировали представление, согласно которому антиидиотипическое антитело определенной специфичности несет в своей структуре внутренний образ антигена. Однако до тех пор, пока за этим понятием стояли лишь иммунологические феномены (функция лишь одной системы организма — иммунной системы), речь практически шла о существовании у человека и высших животных внутреннего образа веществ, наделенных функцией антигенов. Антиген, как чужеродный, так и собственный для данного организма, как бы проникает в иммунную систему, которая имеет свою собственную внутреннюю жизнь . С обнаружением антирецепторов "(имитаторов лигандов), производимых клетками, которые не обладают свой- [c.95]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология