Электрофорез и у-Элиминация

Другой подход к определению размера вставки состоит в обращении тех реакций, которые использовались при конструировании рекомбинантных молекул, т.е. в вырезании вставок с помощью соответствующих эндонуклеаз рестрикции (рис. 7.1, А). Размер линейной вставки определяют с помощью гель-электрофореза. Поскольку карта сайтов для эндонуклеаз рестрикции в векторной молекуле обычно бывает известна, идентифицировать встроенный фрагмент довольно легко. Если при лигировании произошла элиминация эндонуклеазных сайтов на концах вставки (т.е. лигировались тупые концы), можно использовать альтернативную процедуру разрезать векторную молекулу по сайтам, находящимся в участках, которые фланкируют вставку в этом случае вставка будет вырезана вместе с сегментами вектора известных размеров (рис. 7.1, Б). Иногда ситуация осложняется тем, что сама вставка содержит сайты узнавания для используемой эндонуклеазы (рис. 7.1, В). В таком случае сумма размеров всех фрагментов, образующихся из вставки, даст ее общую длину. Если вставка слишком велика, то ее разрезание и суммирование могут оказаться даже необходимыми для более точного определения длины. [c.317]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология