Рестриктирующие эндонуклеазы рестриктазы

Используйте ДНК, очищенную, как описано в разд. 2.2.1.1, и разводите ее только непосредственно перед каждым использованием. Отберите 180 мкл и добавьте 20 мкл соответствующего 10-кратного рабочего буферного раствора рестриктирующей эндонуклеазы (рестриктазы) и тщательно перемешайте. [c.44]

Набор фрагментов, получающихся при расщеплении ДНК определенной рестриктирующей эндонуклеазой, является своеобразным отпечатком пальцев этой ДНК. Определяя, какие фрагменты образуются при расщеплении ДНК несколькими рестриктазами по отдельности и в разных комбинациях, часто удается установить порядок расположения сегментов в исходной молекуле, т.е. построить физическую карту ДНК, где указано положение каждого сегмента (рис. 4.11). Сложные геномы или больщие молекулы ДНК дают при обработке рестриктирующими эндонуклеазами сложные наборы фрагментов, и для их анализа используют специальные компьютерные программы. [c.218]

Представление о том, что носителем генетич. информации является ДНК, возникло еще в 1944. Было известно также, что ген представляет собой отрезок ДНК, кодирующий определенный белок, и что передача наследств. ин(]юр-мации между поколениями происходит посредством удвоения молекул ДНК. Но любым манипуляциям препятствовала огромная молекулярная масса ДНК, составляющая миллионы и миллиарды иа клетку, и невозможность получать химически однородные небольшие ее фрагменты. Положение изменилось, когда удалось обнаружить и выделить два рода ферментов 1) рестриктирующие эндонуклеазы (рестриктазы)-они рассекают молекулы ДНК в пределах строго определенных нуклеотидных последовательностей их описано ок. 400, наиб, употребительны рестриктазы E o RI, Hind III, Bam HI, Pst I, Sal I и др. 2) ДНК-лигазы (прежде всего фермент кишечной палочки, индуцируемый бактериофагом Т4), к-рые сшивают двухцепочечные фрагменты ДНК, восстанавливая межнуклеотндные связи в местак единичных разрывов. С помощью этих ферментов получают удобные для генетич. операций фрагменты ДНК и соединяют их в единое целое. Для такого объединения безразлично происхождение ДНК (химически у всех существ она одинакова), между тем в природе объединению генетич. информации неродственных существ препятствуют разл. межвидовые барьеры. [c.518]

Более детальный анализ последовательностей, необходимых для функционирования промотора, производится с помощью метода сканирования линкером. Этот подход позволяет вводить наборы мутантных последовательностей в определенные участки гена. Постановка опыта изображена на рис. 11.7. В область исследуемого гена вводят делеционные мутации. В одном случае создается набор фрагментов, имеющих делеции с 5 -конца гена, в другом случае-с З -конца. Делектируемые области заменяются последовательностью линкера, который представляет собой короткий синтетический олигонуклеотид, содержащий участок узнавания определенной рестриктазой. Фрагменты обоих типов расщепляют рестриктирующей эндонуклеазой и затем соединяют друг с другом, таким образом, чтобы произошло объединение линкеров (смотри реакцию расщепления рестриктирующими ферментами в гл. 17). [c.152]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология