тушение флуоресценции гаптеном

Тушение флуоресценции антител с помощью гаптена не обусловлено прямым контактом гаптена с хромофором. Тем не менее существует тесная связь между сродством антител к гаптену и эффективностью тушения флуоресценции антитела. Возможно, большая часть остатков триптофана в молекуле антитела осуществляет безизлучательный переход нз возбужденного в основное состояние, передавая энергию одному пли нескольким остаткам триптофана в районе активного центра последние отвечают за флуоресценцию всей молекулы. [c.248]

Реакция гаптена с антителом может быть зарегистрирована с помощью техники спектрофлуорометрии. Как известно, флуоресценция триптофансодержащих белков обусловлена почти исключительно индольными остатками триптофана. Последние, находясь в неполярном микроокружении, флуоресцируют с максимумом при 330 нм в случае облучения белка ультрафиолетом с длиной волны 270—290 нм. Если в активном центре антитела находится гаптен, одна из полос в спектре поглощения которого совпадает с полосой поглощения триптофана, происходит тушение флуоресценции триптофана, содержащегося в молекуле антитела, а следовательно, флуоресценции собственно молекулы антитела (5. УеИск е1 а ., 1963). Такой феномен наблюдается при взаимодействии нитрофенильных гаптенов с направленными к ним антителами. Степень тушения достигает 70% для нерасщепленного антитела и 907о для его РаЬ-фрагмента. Чувствительность метода при использовании чистых антител очень велика на одно определение достаточно 50 иг антител. [c.248]

Константы связывания для гаптенов были определены методами равновесного диализа и спектроскопии. Например, присоединение окрашенного гаптенатипадини-трофенильного производного тушит флуоресценцию остатков триптофана в белке-ан-тителе. Степень тушения служит мерой насыщения участков связывания в молекуле белка. Для большинства гаптенов константы связывания лежат в пределах от [c.236]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология