Клонирование линий гибридомных клеток

Клонирование лучще всего проводить или на ранней стадии, чтобы не допустить вытеснения медленно растущего клона клетками быстрорастущих соседних клонов, или на конечной стадии, когда получена стабильная линия антителообразующих клеток. В последнем случае клонирование, как правило, лищь формально подтверждает моноклональность. Если до стадии продукции антител клонирования не проводили, то его необходимо осуществить позднее, в том числе и с уже клонированными линиями. Цель такого подхода — удаление непродуцирующих антитела клонов, которые иногда образуются после длительного культивирования. Если данные клоны не отделить в процессе последующего клонирования, то они могут постепенно вытеснить другие антителообразующие клоны. Некоторые линии чрезвычайно стабильны и не требуют повторного клонирования. У других гибридомных линий изменяются ростовые характеристики и антителообразующая активность. В этом случае иногда целесообразно повторное клонирование, но некоторым линиям свойственна нестабильность. Поэтому сразу после клонирования линии клеток следует немедленно заморозить (по меньшей мере 10 ампул) в жидком азоте. Ими можно будет воспользоваться, если клонированная линия окажется нестабильной при дальнейшем культивировании. [c.138]

Клетки нз всех лунок, оказавшиеся при скрининге положительными, надо субкультивпровать. Для этого переносите содержимое этих лунок в 24-луночиый планшет и добавьте в каждую лунку по 0,5 мл свежей среды. Клетки из такого планшета могут служить источником для клонирования клеток данной гибридомной линии кроме того, их можно рассеять на чашке Петри диаметром 90 мм и заморозить. Если слияние оказалось очень удачным, можно сразу не справиться с размножением и клонированием слишком большого количества клеток. В такой ситуации лучше выбрать только пять или десять положительных колоний для немедленного их размножения, а остальные заморозить до проведения дальнейших исследований. После размножения колоний в планшете с 24 лунками скрининг следует повторить и, кроме того, провести и более жесткий скрининг другим способом. Если в результате слияния во многих лунках наблюдается рост клеток и обнаруживаются антитела к -галактозидазе, но не обнаруживается антител к белковому продукту встроенного фрагмента, тогда единственно, что остается делать, — это повторить слияние в тех же условиях, в которых проводилось предыдущее. Если, однако, в результате слияния вообще образуется небольшое число клонов гибридных клеток, тогда стоит попробовать внести изменения в методику слияния. К ним относятся использование так называемого питающего слоя для роста клеток и внесение в среду добавок. [c.192]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология