Клетки человека, клоны

МИ ВЫСОКИМИ дозами радиации. Мертвые вирусы проникают через клеточную поверхность, по не размножаются. Однако изменения клеточной поверхности, индуцированные проникновением вируса, делают клетки способными сливаться друг с другом. Видовая специфичность при этом не проявляется. Клетки человека могут сливаться с клетками мыши, клетки мыши — с клетками цыпленка и т. д. В течение многих часов ядра гибридной клетки остаются обособленными (за это время можно получить ответы на вопросы, подобные тем, которые были поставлены выше). Позднее оба ядра одновременно переходят к митозу, во время которого, как и в норме, оболочки ядер исчезают, хромосомы удваиваются и разделяются. Когда ядерная оболочка образуется вновь, возникают два гибридных ядра и дочерние клетки отделяются друг от друга. Гибридное ядро продолжает делиться, и возникает клон гибридных клеток. Такие клетки нельзя назвать стабильными. В течение последующих ядерных делений часть хромосом постепенно утрачивается, и число их сокращается до стабильного диплоидного набора. Если при гибридизации использованы клетки разных видов, то теряются преимущественно хромосомы одного вида. Например, в гибридных клетках человека и мыши постепенно утрачиваются хромосомы человека. [c.229]

Возможность генетической трансформации клеток млекопитающих впервые продемонстрировал Л. Краус в 1961 г. Он выделил ДНК из костного мозга человека, гомозиготного по уЗ -полипептиду гемоглобина, и обработал этим препаратом культивируемые клетки костного мозга от пациента с серповидно-клеточной анемией ф ). В результате клетки человека приобрели способность продуцировать кроме полипептида и полипептид Однако в данном случае отбор клонов трансформированных клеток бьш значительно затруднен, так как для рассматриваемого признака не найдены условия селекции. [c.339]

С другой стороны, в некоторых клетках процесс необратимой дифференцировки сопряжен с потерей части генома. Крайним выражением этой ситуации являются эритроциты человека, полностью утратившие ядро. В других клетках разрушаются отдельные хромосомы. Возможны и такие случаи, когда хромосома или ее часть необратимо инактивируется и остается в клетке в виде компактного образования — гетерохроматина. Этим термином обозначают интенсивно окрашивающиеся области клеточного ядра. Некоторые гетерохроматины содержат многократно повторяющиеся последовательности (гл. 15, разд. И, 1,6), но в отдельных гетерохроматиновых областях обнаруживаются группы инактивированных генов. Чрезвычайно интересен случай полной инактивации одной из двух Х-хромосом в клетках самок млекопитающих 1[181]. Вся хромосома при этом выглядит как гетерохроматин. Инактивация происходит на ранней стадии эмбрионального развития и захватывает ту или другую Х-хромосому по принципу случайности в одних клетках инактивируется материнская Х-хромосома, в других—отцовская. Однако при дальнейших клеточных делениях одна и та же хромосома остается инактивированной во всем клоне клеток. В результате в организме особей женского пола возникает мозаицизм по гетерозиготным генам Х-хромосом. [c.363]

По мере развития методов репродуктивной биологии млекопитающих и создания различных трансгенных животных становилось все более очевидным, что клонирование человека - дело не столь отдаленного будущего. Предположение стало реальностью в 1997 г., когда была клонирована овечка, названная Долли. Для этого использовалось ядро дифференцированной клетки донорной суягной овцы. Методический подход, который использовался при создании Долли, в принципе пригоден для получения клонов любых млекопитающих, в том числе и человека. И даже если он не оправдает себя применительно к млекопитающим других видов, по-видимому, не потребуется слишком много экспериментов, чтобы разработать подходящий метод. В результате клонирование человека тотчас станет предметом любой дискуссии, затрагивающей этические проблемы генетики и биологической медицины. [c.530]

Общепризнано, что раковые заболевания у человека, за исключением, возможно, тератом (разд. 15.3.7) и опухолей, вызываемых вирусами, возникают нз клонов мутантных клеток. Однако организм устроен так, что, хотя мутирует много клегок, лишь немногие из них представляют опасность. Чтобы привести к раку, мутация должна возникнуть в клетке, расположенной соответствующим образом, и придать ей целый ряд новых свойств. Есть даже данные о том, что одной мутации, как правило, недостаточно по-видимому, большинство опухолей возникает только после нескольких мутаций в одной и той же клеточной линии. Перед исследователями рака стоят очень трудные задачи приходится анализировать множество различных способов, с помощью которых мутантные клетки нарушают правила альтруистичного поведения, колонизируя участки, в норме предназначенные для клеток других типов. [c.183]

Разнообразные гены были химически синтезированы, введены в клоны и использованы для направленного синтеза белков с помощью рекомбинантной ДНК. Например, инсулин — это белок, применяемый при лечении диабета. Ген, синтезирующий инсулин человека, получен химиками в 1978 г. Он был введен в плазмиду и внедрен в обычную бактерию Е. соИ. Еще один пример — гормон роста человека (соматотропин). Это белок, представляющий собой полипептид из 191 аминокислоты. Ген, кодирующий этот белок, был получен сращиванием одной из природных ДНК с химически синтезированной. В 1979 г. белок начал производиться в клетках Е. соИ. Он испытывается как возможное средство лечения карликовости и сходных заболеваний, вызываемых недостатком гормона роста. [c.119]

Онкогенез, вызываемый у животных ДНК-вирусами. Исследования канцерогенеза у животных нередко проводятся на культурах тканей. Если перенести клетки животных, например из органов кур или хомячков, или фибробласты человека в подходящую питательную среду, то на внутренней стенке культурального сосуда они начнут размножаться. Обычно клетки продолжают расти лишь до тех пор, пока не начнут соприкасаться между собой. Из-за контактного торможения образуется только однослойный клеточный газон. Если же эти нормальные клетки инфицировать опухолеродным вирусом, то контактное торможение снимается, клетки продолжают размножаться и начинают надвигаться друг на друга. Многослойный рост наблюдается только у клеток, претерпевших опухолевую трансформацию. Из клеточной массы легко выделить отдельные клетки и таким путем получить чистые линии (клоны) трансформированных клеток. [c.153]

Какой ИСТОЧНИК ДНК использовать Для оптимальной реализации библиотеки при наличии самых разнообразных стартовых зондов было бы предпочтительнее использовать источник ДНК, представляющей весь геном организма, например периферические лимфоциты донорской крови в случае геномных библиотек человека. Если же предполагается исследование специфической хромосомы, лучше работать с гибридными соматическими клетками, содержащими именно эту хромосому на известном фоне хромосом других видов. Преимущество такой стратегии в том, что она позволяет сразу определить принципиальную ценность клона, полученного при помощи имеющейся библиотеки, путем простой проверки клонированного фрагмента на его принадлежность интересующей хромосоме [17]. [c.101]

Еще о клонах у зародыша мозаицизм по Х-хромосоме у самок млекопитающих. У половозрелых самок млекопитающих, в том числе и у человека, неделящиеся клетки характеризуются некоторыми особенностями конденсации хроматина. Из двух Х-хромосом одна всегда находится в конденсированном состоянии в виде не- [c.232]

Функциональное разнообразие Т-клеток можно продемонстрировать, анализируя профили секреции цитокинов разными клонами Т-хелперов. У мыши и человека идентифицировано по две группы Т-клеточных С04 -клонов. Субпопуляция Тх1 секретирует ИЛ-2 и ИФу, а субпопуляция Тх2 - ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6 и ИЛ-10 рис. 2.10 см. также гл. 11). Клетки Тх1 принимают участие в активации цитотоксических Т-клеток и в местных воспалительных реакциях. Следовательно, они важны для противодействия организма внутриклеточной вирусной, бактериальной или паразитарной инфекции. Клетки же Тх2 более эф- [c.24]

Г-н. стала основой развития молекулярной генетики. Благодаря возможности клонирования чужеродных генов в бактериях, животных и растит, клетках (выделеньг клоны мн. генов рибосомной РНК, гистонов, интерферона и гормонов человека и животных и т. п.), Г. и. имеет прикладное значение. Она составляет, наряду с клеточной инженерией, основу совр. биотехнологии. С помощью методов Г. и. получены мн. иовые, иногда неожиданные данные, открыто, напр., мозаичное строение генов у высших организмов, изучены транспозоны бактерий и мобильные диспергированные элементы высших организмов, открыты онкогены и т.п. (см. Мигрирующие генетические элементы). [c.518]

Т-клетки человека экспрессируют белки МНС класса II и могут взаимно презентировать друг другу антигенные пептиды. В результате либо развиваются толерантность, обусловленная снижением экспрессии рецепторов, и анергия, либо происходит активация, в зависимости от природы Т-клеток и антигена. Исследования, проведенные на клонах Т-клеток мыши, показали, что активация в отсутствие костимулирующих сигналов неизбежно приводит к развитию анергии. Презентация пептидных антигенов АПК на химически фиксированных АПК или на искусственных мембранах, содержащих белки МНС класса II, вызывает анергию, как это происходит в случае активации Т-клеток антителами против ТкР, иммобилизованными на пластико- [c.270]

Перестройка генов — явление, наиболее отчетливо наблюдаюшееся при формировании разнообразия иммуноглобулинов (1 ). В организме каждого человека имеется около 10 клонов В-лимфоцитов. Клетки одного клона синтезируют 1 или антитела только одного вида, поэтому в организме число разных 1 достигает порядка 10 . Существование такого многообразия белков обеспечивают специальные механизмы рекомбинаций и мутирования. [c.85]

Процедура вьщеления ДНК в клетки дрожжей довольно проста. Обычно целлюлозную клеточную стенку удаляют обработкой ферментами, получая так называемые сферопласты. Их инкубируют с ДНК в присутствии СаС и полиэтиленгликоля. Мембрана при этом становится проницаемой для ДНК. Дальнейшая ин( а-ция сферопластов в среде с агаром восстанавливает клеточную стенку. Селекция дрожжевых клонов, трансформированных рекомбинантными плазмидами, основана на применении в качестве клеток-хозяев определенных мутантов, не способных расти на среде, в которой отсутствует тот или иной питательный компонент. Векторная плазмида содержит гены, которые при попадании в клетку-хозяина придают ей этот недостаюший признак. Трансформанты легко отбираются по их способности давать колонии на обедненной среде. Применяя приемы, аналогичные использовавшимся при клонировании в бактериях, удается достичь синтеза чужеродных белков в дрожжевых клетках. Эти клетки подобно В. subtilis секретируют большое количество белка во внеклеточную среду, что используется также для секреции чужеродных белков, например интерферона человека (с. 43). [c.125]

Векторные системы, способные интегрировать крупные вставки (>100 т. п. н.), имеют большую ценность при анализе сложных эукариотических геномов. Без таких векторов не обойтись, например, при картировании генома человека или при идентификации отдельных генов. В отличие от библиотек с небольшими вставками, в геномной библиотеке с крупными вставками скорее всего будет представлен весь генетический материал организма. Кроме того, в этом случае уменьшается число клонов, которые нужно поддерживать, и увеличивается вероятность того, что каждый из генов будет присутствовать в своем клоне. Для клонирования фрагментов ДНК размером от 100 до 300 т. п. н. был сконструирован низкокопийный плазмидный вектор на основе бактериофага Р1 — химерная конструкция, называемая искусственной хромосомой на основе фага Р1. Был создан также очень стабильный вектор, способный интегрировать вставки длиной от 150 до 300 т. п. н., на основе Р-плазмиды (F-фактора, или фактора фертильности) Е. соИ, которая представлена в клетке одной или двумя копиями, с селекционной системой la Z векторов pU . Эта конструк- [c.76]

В одной из схем В-лимфоциты человека, активно продуцирующие специфические антитела, обработали флуоресцентно меченным антигеном, затем с помощью клеточного сортера провели обогащение образца В-лимфоцитами, вырабатывающими эти антитела. Поскольку В-клетки плохо растут в культуре, для улучшения роста их трансформировали вирусом Эпштейна-Барр. Некоторые клоны трансформированных В-кле- [c.214]

Интерес общественности к возможности клонирования человека возник в 1960-х гг., после того как были проведены соответствующие эксперименты на лягушках и жабах. Эти исследования показали, что ядро оплодотворенной яйцеклетки можно заменить ядром недифференцированной клетки, и при этом эмбрион будет развиваться нормально. Таким образом, в принципе можно выделить ядра из недифференцированных клеток какого-либо организма, ввести их в оплодотворенные яйцеклетки того же самого организма и получить потомство с тем же генотипом, что и у родителя. Другими словами, каждый из организмов-потомков можно считать генетическим клоном исходного донорного организма. В 1960-е гг. казалось, что, несмотря на отсутствие технических возможностей, не составляет труда экстраполировать результаты клонирования лягушки на человека. В прессе появилось множество статей на эту тему, были даже написаны нучно-фантастические произведения. Один из рассказов был посвящен клонированию вероломно убитого президента США Джона Ф. Кеннеди, однако более популярной темой было клонирование злодеев. Произведения о клонировании человека были не только неправдоподобными, но и пропагандировали ошибочную и весьма опасную идею, что личностные особенности, характер и другие качества [c.529]

Особенно эффективно применение мкАТ в онкологии. Для диагностики опухолевых заболеваний необходимо получение гибридомных клонов, взаимодействующих только с раковыми клетками. Была разработана такая гибридомная техника, в результате чего оказалась возможной диагностика рака толстой кишки, щитовидной железы, нейробластом, лейкозов и других опухолей. Радиоиммунная диагностика на основе моноклональных антител дала возможность выявить опухоль передней доли гипофиза на ранних стадиях развития патологического процесса. В некоторых случаях с помощью мкАТ удается идентифицировать природу раковых антигенов. Так, антиген, локализованный на поверхности мела-номных клеток человека, представляет собой гликопротеин с разветвленной [c.495]

В течение жизни в человеческом организме происходит около 10 клеточных делений. Время от времени возникают спонтанные мутации для клеток человека их феднюю частоту оценить трудно, но, по-видимому, она составляет около 10 мутаций на один ген за одни цикл деления. Таким образом, на протяжении жизни каждого индивида обычный ген, вероятно, может подвергнуться мутации примерно в 10 ° отдельньк случаях. Среди мутантных соматических клеток почти наверняка будет много таких, которые делятся, игнорируя нормальную регуляцию или быстрее, чем немутантиые клетки того же типа. Поэтому проблема рака состоит не в том, почему он юзникает, а в том, почему он возникает не так уж часто. Почему наш организм не переполнен непрерывно появляющимися мутантными клонами, имеющими селективное преимущество перед нормальными клетками [c.182]

Это центральное положение клонально-селекционной теории иммунитета долгие годы вызывало большие дискуссии. Была понятна предтерминированность к антигенам, с которыми организм встречался в процессе филогенеза, но возникали сомнения действительно ли есть Т-лимфоциты с рецепторами к новым (синтетическим и химическим) антигенам, возникновение которых в природе связано с развитием технического прогресса в XX веке. Однако специальные исследования, проведенные с помощью наиболее чувствительных серологических методов, выявили у человека и более чем у 10 видов млекопитающих нормальные антитела к ряду химических гаптенов — динитрофенилу, З-йод-4-оксифенилуксусной кислоте и т. д. [118]. По-видимому, трехмерные структуры рецепторов действительно весьма разнообразны, и в организме всегда может найтись несколько клеток, рецепторы которых достаточно близки к новой детерминанте. Возможно, что окончательная притирка рецептора к детерминанте может происходить после их соединения в процессе дифференцировки Трлимфоцитов в Тг-лимфоциты после встречи со своим антигеном Тр клетка путем одного — двух делений превращается в ан-тигенраспознающую и активированную (коммитирован-ную, примированную по терминологии разных авторов) антигеном долгоживущую Тг-клетку. Тг-лимфоциты способны к рециркуляции, могут повторно попадать в тимус, чувствительны к действию анти-0-, антитимоцитарных и антилимфоцитарных сывороток. Эти лимфоциты составляют центральное звено иммунной системы. После образования клона, т. е. размножения путем деления в морфологически идентичные, но функционально неоднородные клетки, Т-лимфоциты активно участвуют в формировании иммунного ответа. [c.8]

Клонирование человеческого зародыша было проведено в США в 1993 г., однако клоны удалось довести до стадии всего нескольких клеток, т. е. показать, что в принципе это возможно. (В Великобритании клонирование человека было запрещено по этическим причинам.) Однако применительно к другим видам животных клонирование представляется перспективным. Можно, например, использовать зародыши животных на стадии нескольких клеток и, разделив такой зародыш на отдельные клетки, получить некоторое число идентичных близнецов. Этот процесс можно повторять многократно, потому что на этой стадии клеТки еще не достигают необратимой специализации. Таким образом можно создать множество идентичных копий одного животного, обладающего ценными признаками. Затем полученные зародыши можно пересадить в суррогатных матерей (реципиентов) для дальнейшего роста и — в конечном итоге — рожде- [c.46]

Рис. 18.6. Отбор стабильных гибридных клеточных клонов по методу HAT. В том случае, если родительская линия клеток мыши лишена тимидин-киназной активности, на селективной среде HAT будут образовывать колонии только гибридные клетки, содержащие хромосому человека 17. В этой хромосоме расположен ген ТК человека.

Обычно гибридные клеточные линии используются для определения корреляции между экспрессирующимися генами и присутствующими в клетках хромосомами человека. Для того чтобы уменьшить количество анализируемых клонов, можно применить селекционные методы, позволяющие отобрать клоны, которые содержат лишь некоторые хромосомы исследуемого генома. Ограничимся хромосомами человека 1 -8. Составьте таблицу, состоящую только из трех клонов (т.е. припишите каждому клону хромосомы, которые должны в нем присутствовать), таким образом, чтобы можно было определить хромосомную локализацию любого экспрессирующегося гена человека, расположенного в одной из этих восьми хромосом. [c.333]

Рис. 4-40. Схема, иллюстрирующая слияние клеток человека и мыши, приводящее к образованию гетерокарионов, имеющих по одному или более ядер В некоторых случаях из гетерокарионов образуются гибридные клетки с одним слившимся ядром. Такие гибридные клетки используются для картирования индивидуальных генов в определенных хромосомах человека. Возможность такого картирования обусловлена тем, что гибридизация сопровождается быстрой потерей большинства хромосом человека, происходящей случайным образом. В образующихся клонах сохраняется только одна или несколько хромосом человека. В гибридных клетках, образованных в результате слияния клеток других типов, часто

При достижении полного монослоя первичную культуру следует пересеять в 2 или 4 новых флакона, причем рассев культуры может повторяться примерно с недельным интервалом в течение нескольких месяцев. Клетки могут при этом оставаться диплоидными и сохранять многие характерные особенности исходного эксплантата. Такую культуру называют клеточной линией. В ней может присутствовать несколько различных сортов клеток, и некоторые характерные особенности клеток могут оказаться нестабильными. Клетки можно клонировать (гл. 8), причем некоторые клоны могут обладать стабильным фенотипом. К таким клонам относится штамм эмбриональных легочных клеток человека, WI38, который продается в замороженном состоянии после нескольких пассажей. [c.18]

Экспансия клона клеток, прекоммитированных к синтезу антител против ДНК, может возникать при опухолевом процессе у человека — так называемой множественной миеломе. Клетки аналогичной опухоли мышей (плаз-мацитома) продуцируют иммуноглобулины, специфически взаимоденству ющие как антитела с рядом пуриновых и пиримидиновых оснований. [c.39]

Описанная методика отбора и выращивания Т-клеток согласуется с современными представлениями о физиологии Т-кле-ток. Контакт со специфическими аллоантигенами клеток-стимуляторов индуцирует Т-хелперные клетки как к интенсивной экспрессии рецепторов для ИЛ-2, так и к выработке этого лимфокина, что приводит к нескольким циклам аутостимуляции (Меиег et al., 1984). Некоторое время пролиферацию можно поддерживать добавлением экзогенного ИЛ-2, однако спонтанная обратная регуляция рецепторов ИЛ-2 приводит к постепенному уменьшению скорости роста, которую можно восстановить только повторной стимуляцией антигеном. Таким образом, повторная стимуляция служит двум целям — восстановлению чувствительности к ИЛ-2 и отбору антиген-специфи-ческих Т-клеток. Следует отметить, что мы никогда не наблюдали образования независимых от повторной стимуляции Т-клонов, приобретающих способность неограниченно расти в присутствии ИЛ-2. О возникновении таких клонов неоднократно сообщали авторы, работающие с Т-клетками мыши. Главное усовершенствование в культивировании Т-клеток человека состоит в возможности использования рекомбинантного ИЛ-2. При этом облегчается контроль условий культивирования и при достаточно высоких концентрациях ИЛ-2 отпадает необходимость в частых повторных стимуляциях. [c.277]

Прямоугольные пластинки полиакриламидного геля имеют ряд преимуществ по сравнению с цилиндрическими гелями поэтому ниже приводится описание аппаратуры для электрофореза на пластинках, хотя из тех же самых растворов можно приготовить и цилиндрические гели. Электрофорез на одной пластинке удобнее всего для прямого сравнения нескольких образцов в совершенно одинаковых условиях (pH, температура, сила тока, градиент напряженности поля). Пример представлен на рис. 1 здесь изучалась кинетика синтеза белков, кодируемых бактериофагом Т4, в клетке Es heri hia oli. В данном случае особенно важна идентичность условий, так как спектр синтезируемых полипептидов быстро меняется и различия в величине молекулы между некоторыми синтезируемыми белками весьма незначительны. Другой пример показан на рис. 2 здесь удалось установить очень небольшие различия в величине молекул IgD-подобных иммуноглобулинов, секретируемых восьмью клонами одной линии лимфобластов человека. [c.101]

Было получено четыре гибридные клетки от слияния клеток человека и мьшш. В процессе культивирования у них происходила утрата только человеческих хромосом. В результате было получено четыре клона (табл. 44). [c.68]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология